[发明专利]一种矮姜花的组织培养方法

说明书

本发明公开了一种矮姜花的组织培养方法，包括种子前处理、无菌苗与下胚轴愈伤组织诱导、愈伤增殖和转绿、丛生芽诱导和增殖、生根壮苗和移栽。本发明取矮姜花的果皮变黄尚未裂开的果，用刀片切去果蒂和果尾后消毒，将消毒好的果切开，取种子播在愈伤诱导培养基上培养，直至无菌苗的下胚轴形成白色愈伤组织创面；切掉无菌苗的下胚轴以上的部分、根和种子，将白色愈伤组织逐步转接到愈伤组织增殖和转绿培养基、丛生芽诱导和增殖培养基上诱导和增殖丛生芽；沿芽基部切下芽转移至壮苗生根培养基上培养30～40d，再在自然光照下炼苗12～15d，取出苗移栽，获得矮姜花的再生植株。本发明成本低，为矮姜花的组培快速繁殖和基因工程研究奠定基础，有利于矮姜花种苗的大规模生产应用。

技术领域

本发明涉及植物组织培养方法，具体涉及一种矮姜花的组织培养方法。

背景技术

矮姜花(Hedychium brevicaule D.Fang)属于姜科(Zingiberaceae)姜花属(Hedychium)植物，产我国广西，株高20～60cm，花期1～3月；苞片红褐色，花纯白色，花丝与唇瓣等长或稍长，花药长9mm；具浓郁兰花香、极矮生(胡秀，等2010；吴德邻，等2016)。矮姜花的根茎可用于咳嗽痰喘和支气管哮喘，也可盆栽观赏(吴德邻，等2016)。因此，矮姜花在药用和观赏方面具有很高的经济价值和市场开发利用前景。

矮姜花的繁殖方法主要依靠切分根茎和种子繁殖(胡秀，等2011)。由于矮姜花的分蘖数少，切分根茎的繁殖速度慢；种子从播种至开花需要两年至三年的时间，因此，这两种繁殖方法效率低，不能为其市场化应用提供足够的种苗，导致栽培规模扩大化的难度大。采用组织培养技术通过诱导愈伤组织获得再生植株，可为瓶苗的大规律繁殖提供一条有效途径。

姜花属植物的组织培养研究集中在白姜花(H.coronarium)(熊友华，等2005，2011；肖望，等2016；Hu，等2020)、红姜花(H.coccineum)(涂红艳，等2014；羡蕴兰，等1989)、金姜花(H.gardnerianum)(涂红艳，等2017)、H.muluense(Hamidou，等2008)和H.bousigonianum(Hamidou，等2009)。采用H.muluense茎尖生长点为外植体诱导愈伤组织，通过悬浮培养的方式对愈伤组织进行预培养，再对悬浮培养物进行体胚诱导；再用水杨酸和硝酸银对H.bousigonianum愈伤组织增殖和体胚诱导过程进行调控，对提高体胚发生的频率有一定作用(Hamidou，等2008，2009)。以白姜花的成熟种子萌发的无菌苗的下胚轴或不定芽为外植体，接种在MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA上培养时，通过诱导丛生芽繁殖并产生完整植株(熊友华，等2005，2011)；以白姜花的未成熟花丝为外植体，接种在MS+4mg/L 2,4-D+4mg/L NAA+1mg/L 6-BA的培养基上，经过180d的培养，诱导出愈伤组织(肖望，等2016)；以白姜花的假茎节段为外植体，接种在MS+3～5mg/L 6-BA+2mg/L TDZ+0.01mg/LNAA的培养基上，诱导出类原球茎(Hu，等2020)。以红姜花的花序轴和苞片为外植体，接种在MS+1mg/L 6-BA+2mg/L NAA的培养基上，通过诱导愈伤组织形成不定芽的方式获得再生植株(羡蕴兰，等1989)；以红姜花的花丝和花药为外植体，接种在MS+4mg/L 2,4-D+4mg/L NAA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基上，经过120d的培养，诱导出愈伤组织(涂红艳，等2014)。以金姜花的根状茎腋芽的0.5～2.0cm的芽顶端为外植体，接种在MS+5.0mg/L6-B+0.2mg/L NAA培养基上诱导出不定芽(涂红艳，等2017)。