[发明专利]一种植物源脱氧胆酸中间体的制备方法

权利要求书

1.一种植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、以(20S)-9-羟基-3-酮基孕甾-4-烯-20-羧酸甲酯为起始原料，在无机酸和冰醋酸的作用下，脱水合成化合物B1；

步骤2、化合物B1在反应溶剂的作用下加氢还原生成化合物A2；

步骤3、化合物A2在3α-羟基类固醇脱氢酶作用下还原酮基为化合物A3

2.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的无机酸包括硫酸和磷酸中的一种，优选无机酸为硫酸；所述步骤1中的反应温度为0～60℃，优选步骤1中的反应温度为30～40℃。

3.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的反应溶剂包括四氢呋喃、无水乙醇、甲醇和二氯甲烷中的一种或两种，优选反应溶剂为无水乙醇。

4.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤2中还添加了有机碱，所述步骤2中的有机碱包括吡啶、1-甲基咪唑、三乙胺和4-二甲氨基吡啶中的一种或两种。

5.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的反应温度为0～40℃，优选步骤2中的反应温度为30～35℃；所述步骤2中的氢气压力为0～0.4Mpa，优选步骤2中的氢气压力为0.2～0.4MPa。

6.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤3中的3α-羟基类固醇脱氢酶的使用形态为纯化酶或者细胞破碎后的酶液；所述步骤3中还原采用了助溶剂，助溶剂包括叔丁醇、异丙醇和二甲基亚砜中的一种。

7.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，反应溶液的PH值为6.5～8.0，反应温度为28～35℃，使用氢氧化钠水溶液调节pH值，氢氧化钠水溶液浓度为2％～10％。

8.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：

在反应容器中加入无机酸、冰醋酸和起始物(9α,20S)-9-羟基-3-酮基孕甾-4-烯-20-羧酸甲酯，控温反应1～4h，TLC检测反应至完全；将反应液加入到冰水浴中，搅拌一段时间后过滤，用水淋洗至中性，将得到的滤饼湿品用二氯甲烷溶解，用氢氧化钠调PH值至中性，分液，收集有机层，减压浓缩，甲醇置换，最终浓缩至粘稠状态，过滤，滤饼干燥后得到化合物B1。

9.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤2具体包括：在高压罐中加入反应溶剂，搅拌下加入起始物B1和钯碳，在氢气加压条件下反应一段时间，TLC检测反应至完全，过滤除钯碳，然后减压浓缩，用水置换，水析出料，水淋洗，滤饼干燥后得到化合物B1。

10.根据权利要求1所述的植物源脱氧胆酸中间体的制备方法，其特征在于，所述步骤3具体包括：

在反应瓶中加入水，搅拌下加入化合物A2和助溶剂，调节pH值，待化合物A2全部溶清后，调节反应温度，加入葡萄糖、3α-羟基类固醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、辅酶I；搅拌均匀后，调节pH后反应2～4小时，TLC监控化合物A2无明显剩余或不再减少；

将反应液进行真空浓缩至稠状，加入水，降温至5℃以下搅拌一段时间，过滤，得含蛋白的粗品；粗品用二氯甲烷和甲醇溶解，室温搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至一定体积后用甲醇置换，降温至0～10℃，过滤，烘干得化合物3。