[发明专利]一种用于新生儿免疫缺陷病筛查的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于新生儿免疫缺陷病筛查的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括有寡核苷酸序列组合、阴性质控品和阳性质控品和实时荧光PCR扩增的必要试剂Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶、PCR缓冲液、PCR增强剂等；

所述寡核苷酸序列组合为：

(01)GCGTGACCTACTGACTC；

(02)GCGTGATGCATCGTACC；

(03)GCGTGACCTACTGACTCTGCTGACACCTCTGGTTTTTGTAA；

(04)GCGTGATGCATCGTACCACTCGTGAGAACGGTGAATGAAG；

(05)CCCACTCCTGTGCACGGTGATGCAT；

(06)GCGTGACCTACTGACTCAGCTCAGCGCCCATTACGTT；

(07)GCGTGATGCATCGTACCAGGAGCCAGCTCTTACCCTAGAGT；

(08)GTGCACAGTGTGCGCTGCCAACC；

(09)GCGTGACCTACTGACTCGGCCATATTACTGACCCTCTACAGA；

(10)GCGTGATGCATCGTACCGAAAGATCAAAGCCTTGCAGGTAAT；

(11)ACCACCTGCCTTTATCCTGCAATACCA；

所述序列01和序列02为通用引物Tag序列，所述序列03、04、06、07分别为连接有通用引物Tag序列的靶标特异的序列，所述序列05、08、11为荧光探针序列并分别检测TREC、KREC和B2M基因，所述序列05设计于TREC连接点处并横跨连接点两侧，所述序列06设计于KREC连接点处并横跨连接点两侧；

新生儿免疫缺陷病筛查包括以下步骤：

第一步：准备寡核苷酸序列组合、阴性质控品和阳性质控品和实时荧光PCR扩增的必要试剂Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶、PCR缓冲液、PCR增强剂等备用；

第二步：阳性质控品使用293T细胞系与商品化红细胞和血浆按比例混合，之后制备成干血片；

第三步：阴性质控品使用基因敲入的293T细胞系与商品化红细胞和血浆按比例混合后，之后制备成干血斑片；

第四步：将第三步的基因敲入的293T细胞系，可使用CRISPR技术将TREC特征序列和KREC特征序列敲入293T细胞系；

第五步：将上述材料放置于试剂盒内即可。

2.根据权利要求1所述的一种用于新生儿免疫缺陷病筛查的试剂盒，其特征在于：所述序列05、08、11的荧光报告基团可互不干涉地选自FAM、HEX、VIC、ROX、JOE、CY3、CY5、CY5.5、TET和5-TAMRA等，所述序列05、08、11的荧光报告基团可根据荧光报告集团的匹配性选自BHQ0、BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB、Dabcyl、TAMRA等。

3.根据权利要求1所述的一种用于新生儿免疫缺陷病筛查的试剂盒制备方法，其特征在于：所述第五步中TREC特征序列为：

GCTCTGAAAGGCAGAAAGAGGGCAGCCCTCTCCAAGGCAAAATGGGGCTCCTGTGGGGAACAGAGGGGTGCCTCTGTCAACAAAGGTGATGCCACATCCCTTTCAACCATGCTGACACCTCTGGTTTTTGTAAAGGTGCCCACTCCTGTGCACGGTGATGCATAGGCACCTGCACCCCGTGCCTAAACCCTGCAGCTGGCACGGGCCCTGTCTGCTCTTCATTCACCGTTCTCACGAGTTGCAATAAGTTCAGCCCTCCATGTCACACTGTGTTTTCCATCCTGGGGAGTGTTTCACAGCTATCCCAAGCCCCACGCTGA。

4.根据权利要求1所述的一种用于新生儿免疫缺陷病筛查的试剂盒及其制备方法，其特征在于：所述第五步中KREC特征序列为：

TGGAAATTTTCACTAATGAGATATCATAATGAATGTGAATTTTATTTCTGAAATCTCTAATAAATCAGTCTTCTCCCTGGTTTTCCCAGCTCAGCGCCCATTACGTTTCTGTTCTCTTTCCCTTAGTGGCATTATTTGTATCACTGTGCACAGTGTGCGCTGCCAACCTGCTGCCCGTGCAGAAACTCTAGGGTAAGAGCTGGCTCCTGGAGTCCCACCCAGGCTGCGTGTCCCTCACAGTCTGCTCTGTGTCTATGTGTGTGTGTTGGGGGGATATTATTGGACAATTCAAGGGAGGCT。