[发明专利]诊断CFAP70基因突变导致的人弱畸精子症的试剂盒及应用

权利要求书

1.一种CFAP70基因，其特征是：所述CFAP70基因用于作为人弱畸精子症的候选基因诊断对象，所述野生型CFAP70基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

2.如权利要求1所述的一种CFAP70基因，其特征是：所述野生型CFAP70基因的c.2962CT/p.R988X纯合无义突变表示发生了第2962位核苷酸点突变，即c.2962CT，该突变位点由胞嘧啶C突变为胸腺嘧啶T，CFAP70基因的突变cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种CFAP70蛋白，其特征是：所述CFAP70蛋白用于作为人弱畸精子症的候选蛋白诊断对象，所述野生型CFAP70蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.如权利要求3所述的一种CFAP70蛋白，其特征是：所述野生型CFAP70蛋白的c.2962CT/p.R988X纯合无义突变表示发生了第988位氨基酸的变异(p.R988X)，该突变位点由精氨酸变异为终止，即为突变后CFAP70蛋白，所述突变后CFAP70蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：4所示。

5.基于CFAP70基因突变的用于人弱畸精子症遗传检测的试剂盒，其特征是：所述CFAP70基因突变后第2962位碱基序列发生变化，所述试剂盒包括如下组成：

(1)外周血基因组DNA提取的试剂盒，室温保存；

(2)2X PCR预混液，其中含有2X Taq DNA聚合酶、2X PCR反应缓冲液、2X dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸)，4℃保存；

(3)特异扩增CFAP70基因中涵盖第2962位碱基的、长度为813bp(碱基对)产物的一对引物，4℃保存，该一对引物分别包括：

正向引物：如SEQ ID NO：5所示；

反向引物：如SEQ ID NO：6所示；

(4)双蒸水(ddH₂O)，室温保存；

(5)PCR管，室温保存。

6.基于CFAP70蛋白氨基酸变异用于人弱畸精子症遗传检测的试剂盒，其特征是：所述CFAP70基因突变后第988位氨基酸编码终止，导致CFAP70蛋白大小发生改变，所述试剂盒包括如下组成：

(1)精子蛋白裂解液，4℃保存；

(2)5X蛋白上样缓冲液，室温保存；

(3)对照一品：野生型全长CFAP70蛋白变性样品，-20℃保存；

(4)对照二品：CFAP70截短体蛋白变性样品，-20℃保存；

(5)预染蛋白分子量标准，-20℃保存；

(6)10％SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺)凝胶预制胶，4℃保存；

(7)电泳缓冲液粉末，室温保存；

(8)转膜液粉末，室温保存；

(9)PVDF(聚偏二氟乙烯)膜，室温保存；

(10)PBST(磷酸缓冲盐)粉末，室温保存；

(11)脱脂奶粉，室温保存；

(12)CFAP70抗体工作液，-20℃保存；

(13)羊抗兔HRP(辣根过氧化物酶)标记二抗工作液，-20℃保存；

(14)超敏ECL(增强型化学发光液)A和B，4℃保存。