[发明专利]诊断CFAP70基因突变导致的人弱畸精子症的试剂盒及应用

说明书

本发明公开了诊断CFAP70基因突变导致的人弱畸精子症的试剂盒及应用，涉及弱畸精子症诊断技术领域，其技术要点为：本发明揭示了一个新的弱畸精子症相关的基因突变，即CFAP70基因c.2962CT/p.R988X纯合无义突变。在本发明的方案中，CFAP70基因可作为诊断人弱畸精子症的潜在靶点。本发明还利用Cfap70基因敲除小鼠模型揭示了CFAP70蛋白对于精子鞭毛发育的作用。

技术领域

本发明涉及弱畸精子症诊断技术领域，具体涉及诊断CFAP70基因突变导致的人弱畸精子症的试剂盒及应用。

背景技术

弱畸精子症是一种较常见的导致男性原发不育的类型，与遗传因素密切相关，其主要临床特征是精子运动能力降低和精子尾部鞭毛形态异常。目前弱畸精子症的基因突变谱尚未完全发现，基因型和表型的关系也不明确。随着全外显子测序技术的发展，研究人员在弱畸精子症患者中鉴定到了一些致病遗传学因素，如DNAH1、CFAP43、CFAP44、CFAP47、CFAP58、CFAP65、QRICH2、DNAH17等基因的有害突变。

CFAP70为纤毛/鞭毛发育相关蛋白，其C端含有8个tetratricopeptide repeats(TPR)结构域。关于CFAP70调控纤毛/鞭毛的研究甚少。研究人员利用低温电子断层扫描技术揭示了衣藻中CFAP70定位于鞭毛外动力臂的基底部和中央微管突起物C2a。小鼠脑室管膜细胞中敲低CFAP70水平导致纤毛摆动频率降低，衣藻CFAP70突变体表现出外动力臂缺陷和纤毛运动能力降低。基因敲除小鼠模型是揭示基因功能的重要研究手段，然而目前尚无Cfap70基因敲除小鼠的报道。

2019年，法国格勒诺布尔大学Charles Coutton研究组在167例弱畸精子症患者中发现2例患者携带CFAP70基因突变(c.178TA和c.1723-1G)，提示CFAP70可能是人弱畸精子症新的相关基因。但是，该研究并未证明该突变会导致CFAP70蛋白功能的缺陷、未建立Cfap70基因敲除和/或点突变小鼠揭示CFAP70在精子鞭毛发育中的生理功能。更为重要的是，目前尚未在中国人群中报道CFAP70基因突变。

为此，本发明旨在提供一种CFAP70基因突变导致的人弱畸精子症的试剂盒及应用。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，提供诊断CFAP70基因突变导致人弱畸精子症的试剂盒及应用。

为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种CFAP70基因，所述CFAP70基因用于作为人弱畸精子症的候选基因诊断对象，所述野生型CFAP70基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

进一步地，所述野生型CFAP70基因的c.2962CT/p.R988X纯合无义突变表示发生了第2962位核苷酸点突变，即c.2962CT，该突变位点由胞嘧啶C突变为胸腺嘧啶T，CFAP70基因的突变cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供一种CFAP70蛋白，所述CFAP70蛋白用于作为人弱畸精子症的候选蛋白诊断对象，所述野生型CFAP70蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

进一步地，所述野生型CFAP70蛋白的c.2962CT/p.R988X纯合无义突变表示发生了第988位氨基酸的变异(p.R988X)，该突变位点由精氨酸变异为终止，即为突变后CFAP70蛋白，所述突变后CFAP70蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供一种基于CFAP70基因突变用于人弱畸精子症遗传检测的试剂盒，所述CFAP70基因突变后第2962位碱基序列发生变化，所述试剂盒包括如下组成：

(1)外周血基因组DNA提取的试剂盒，室温保存；