[发明专利]猪笼草组培快速育苗方法及其应用

说明书

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体来说是一种猪笼草组培快速育苗方法及其应用，步骤包括：（1）外植体清洁、（2）外植体消毒、（3）丛生芽诱导、（4）丛生芽增殖和（5）丛生芽生根。本发明提出一种具有诱导褐化率低，继代增殖系数高，增殖周期短、生根时能出笼等优势的猪笼草组织培养快速育苗方法。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体来说是一种猪笼草组培快速育苗方法及其应用。

背景技术

猪笼草（Nepenthes misabilis）又名猪仔笼、捕虫草、公仔瓶、招财进宝、袋袋平安等，为猪笼草科猪笼草属多年生草本植物，我国主要分布于广东西部与南部以及海南，国外主要分布在柬埔寨、缅甸、老挝、泰国、越南、澳大利亚北部以及大洋洲各国等多个国家。猪笼草一般生于海拔50～400m的沼地、路边、山腰和山顶等灌丛中、草地上或林下。

有关猪笼草的文字记载始于1658年法国殖民地马达加斯加的统治者Etienne deFlacourt，1789年Joseph Banks首次将其引种与英国皇家植物园。由于其婀娜多姿的藤蔓、美丽的叶笼和奇特的捕食方式而引起了人们的兴趣，它常用于盆栽或吊盆观赏，十分优雅别致，也具有消灭室内飞虫、净化空气的功能，是目前我国主要的观赏性食虫植物之一。猪笼草在我国最早是因其药用价值而被人们认知，《中华本草》、《广东中药》、《广西本草选编》、《全国中草药汇编》等著名医药书籍均对猪笼草的性味归经等有较为详细的记载。猪笼草以全草入药，有润肺止咳，清热利湿排湿，解热消肿的功效，主要用于肺燥咳血，感冒咳嗽，百日咳，黄疸，痢疾，尿路结石，胃及十二指肠溃疡，高血压，糖尿病，疮殇痈肿等病症的治疗，经现代医药研究表明，其内含黄酮甙、酚类、氨基酸、多糖类、蒽醌甙等有效成分。

由于其兼具观赏性及药用价值，猪笼草市场需求日益增长，野生资源亦由于生态环境的破坏急剧减少，人工栽培是猪笼草的必然发展。但猪笼草为雌雄异株，种子结实率低，同时，其种子发芽率极低，发芽周期较长，发芽后种苗生长缓慢，从而使得猪笼草种子繁殖未成为猪笼草繁殖的主要方式。而猪笼草另一种繁殖方式——扦插繁殖，由于其生长迅速，种苗易得而成为了猪笼草目前最主要的繁殖方式，但其仍然存在繁殖率低，繁殖周期长等缺点。

随着现代生物技术的发展，猪笼草组织培养技术的研究亦逐步开始开展，我国自上世纪90年代就有猪笼草属相关组织培养方面的报道，但猪笼草组培技术发展至今，仍存在初代诱导褐化严重、继代增殖系数低、增殖周期长、生根时几乎不能出“笼”等（图1）。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足，提出一种具有诱导褐化率低，继代增殖系数高，增殖周期短、生根时能出笼等优势的猪笼草组织培养方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种猪笼草组培快速育苗方法，包括如下步骤：

（1）外植体清洁：选择猪笼草幼嫩茎段，剪去叶片，置于饱和肥皂水溶液中涮洗8～10min，后用自来水洗净表面肥皂液，再滴加2～3滴吐温-80，震摇10～15min，最后用自来水冲淋60～80min；

（2）外植体消毒：洗净外植体转移至超净工作台，用75%酒精消毒20～30s，无菌水涮洗2～3次，饱和漂白粉溶液消毒20～25min，无菌水涮洗3～4次，0.1%升汞溶液消毒3～4min，无菌水涮洗3～4次，0.05%升汞溶液消毒8～9min，无菌水涮洗6～7次；

（3）丛生芽诱导：将消毒外植体去表面水分，剪去两端伤口，并将其剪成1～2cm长的具芽小段，接种于1/3MS+NAA 0.05～0.1mg/L+CPPU 0.4～0.5mg/L+KT 2.0～3.0mg/L+硝酸银 1.5～2.0μg/L+活性炭1.0g/L的丛生芽诱导培养基，接种完成后在5±2℃的低温下暗培养6天，后转移至在温度为25±2℃的环境下，再继续暗培养10天，后再以光照强度2000～3000LX，日照光12h的光暗交替下培养30～40天；