[发明专利]具有降血糖功能的香榧肽TGPs-75及其应用

说明书

本发明公开了一种具有降血糖功能的香榧肽TGPs‑75，所述香榧肽TGPs‑75包括如下步骤制备得到：利用碱性蛋白酶对香榧蛋白进行酶解，灭酶后对酶解液进行大孔树脂柱分离纯化，所述大孔树脂为DA201‑C型，依次用15v/v％、35v/v％、55v/v％、75v/v％乙醇洗脱，收集75v/v％乙醇洗脱液并减压浓缩，得75v/v％乙醇洗脱组分即所述香榧肽TGPs‑75。本发明香榧肽TGPs‑75能够实现良好的体内降血糖效果，对开发具备降血糖功能的食品、保健品和药品具有十分重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物活性肽技术领域，具体涉及一种具有降血糖功能的香榧肽TGPs-75及其应用。

背景技术

糖尿病是一种以高血糖为特征的慢性疾病，在世界范围内越来越普遍，预计到2045年，糖尿病患者总数将达到7亿人。目前，糖尿病主要通过人工合成的药物来治疗，长期服用会导致肝胃肠道副作用、肾功能损伤等，且合成药物成本高、价格昂贵。因此，具有良好降低血糖功效的天然产物受到了广泛关注。

生物活性肽是一类对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物，具有安全高效、易吸收、可长期使用的特点，其中具有降血糖功能的肽类多用于开发预防和治疗糖尿病或肥胖症的药物。

香榧(Torreya grandis Merrillii)，属红豆杉科(Taxaceae)榧属(Torreya)，是一种常绿针叶树，广泛分布于浙江、安徽和江西等省份。香榧籽油脂丰富，不饱和脂肪酸成分最多，可用于产油。香榧籽榨油后，残留的饼粕中含有大量蛋白，是优良的蛋白质资源。而优质蛋白是生物活性肽的重要原料。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有降血糖功能的香榧肽TGPs-75及其应用，以解决现有技术的不足。

本发明采用以下技术方案：

本发明第一方面提供了一种具有降血糖功能的香榧肽TGPs-75，所述香榧肽TGPs-75包括如下步骤制备得到：利用碱性蛋白酶对香榧蛋白进行酶解，灭酶后对酶解液进行大孔树脂柱分离纯化，所述大孔树脂为DA201-C型，依次用15v/v％、35v/v％、55v/v％、75v/v％乙醇洗脱，收集75v/v％乙醇洗脱液并减压浓缩，得75v/v％乙醇洗脱组分即所述香榧肽TGPs-75。

进一步地，所述香榧肽TGPs-75具体由如下步骤制备得到：按照3w/v％的底物浓度称取香榧蛋白加蒸馏水制成香榧蛋白溶液，于95℃水浴锅中静置变性15min后冷却至室温，用1.0mol/L NaOH溶液调节pH至10.0，然后加入碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌发酵而来，活性为200U/mg，碱性蛋白酶与香榧蛋白的质量比为5.22：100，于46℃、300r/min下搅拌酶解5.2h；酶解结束后于95℃水浴锅中静置灭酶10min后冷却至室温，于4℃、8000r/min下离心30min，取上清液，-80℃冷冻干燥48h，得到香榧酶解物，于-20℃保存备用；

选用DA201-C大孔树脂柱层析，DA201-C大孔树脂柱尺寸为2.6cm×60cm，加入100mL浓度为10mg/ml的香榧酶解物溶液，所述香榧酶解物溶液为超纯水配制，并在4℃的色谱柜中放置一夜；待树脂吸附平衡后，用超纯水洗去未吸附成功的香榧酶解物，再依次用15v/v％、35v/v％、55v/v％、75v/v％的乙醇溶液进行梯度洗脱，流速恒定为5mL/min，收集75v/v％乙醇洗脱液于45℃下减压浓缩至无乙醇后并于-80℃冷冻干燥48h成粉末，得所述香榧肽TGPs-75。

更进一步地，所述香榧蛋白由如下步骤制备得到：首先将香榧籽去壳后通过液压榨油机冷榨脱脂，条件为室温、50Mpa、40min，得到香榧籽饼粕；之后将得到的香榧籽饼粕粉碎过60目筛，得到香榧籽饼粕粉；将香榧籽饼粕粉和石油醚以质量体积比为1:5的料液比混合，室温、500r/min条件下搅拌提取2h，后室温下进行抽滤，共提取两次后收集滤渣，45℃烘12h，得到香榧籽饼粕脱脂粉，于4℃下冷藏备用；