[发明专利]绿海龟丙肝病毒全基因组序列及其检测方法在审
| 申请号： | 202211335198.X | 申请日： | 2022-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN116064418A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 吴山楠;周宏;史卫峰 | 申请（专利权）人： | 海口海关技术中心 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N15/51;C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 西安正华恒远知识产权代理事务所(普通合伙) 61271 | 代理人： | 傅晓 |
| 地址： | 570311 海南*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 海龟 丙肝 病毒 基因组 序列 及其 检测 方法 | ||
1.一种绿海龟丙型肝炎病毒的全基因组序列，其特征在于，该病毒全基因组序列如SEQID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的绿海龟丙肝病毒全基因组序列，其特征在于，该序列包含一个长的ORF，所述序列如SEQ ID NO:2所示。
3.如权利要求2所述的绿海龟丙肝病毒全基因组序列，其特征在于，所述ORF编码氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.一种用于扩增权利要求1所述绿海龟丙肝病毒全基因组序列的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物序列如下：
5.一种检测权利要求1所述绿海龟丙肝病毒的方法，其特征在于，使用权利要求4所述检测引物进行PCR检测。
6.如权利要求5所述检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取疑似感染病毒的绿海龟病料组织RNA；
(2)将步骤(1)终产物RNA进行cDNA第一链合成，用所述检测引物进行普通定性RT-PCR扩增；
(3)检测，用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物条带，用2kb DNAmarker作为片段大小对照标准，根据电泳图确定检测结果。
7.如权利要求6所述检测方法，其特征在于，步骤(2)中的PCR体系如下：
8.一种用于扩增权利要求1所述绿海龟丙肝病毒全基因组序列的扩增引物探针，其特征在于，所述扩增引物探针序列如下：
9.一种检测权利要求1所述绿海龟丙肝病毒的方法，其特征在于，使用权利要求8所述检测引物探针进行荧光定量RT-PCR检测。
10.如权利要求9所述检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取疑似感染病毒的绿海龟病料组织RNA；
(2)将步骤(1)终产物RNA进行cDNA第一链合成，用所述检测引物探针进行荧光定量RT-PCR扩增；
(3)用荧光定量PCR仪进行检测，根据Ct值及扩增曲线确定检测结果。
11.如权利要求10所述检测方法，其特征在于，步骤(2)中的PCR体系如下：
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