[发明专利]一种菌藻共生球总RNA的提取方法

权利要求书

1.一种菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：将菌藻共生球置于无菌预冷研钵中，加入菌藻共生球质量的1～3倍的石英砂和液氮(使菌藻共生球全部浸没在液氮中)后，迅速充分研磨得到细胞匀浆，离心后收集细胞匀浆上清液，用于后续总RNA提取；所述菌藻共生球为霉菌与微藻共生培养形成。

2.如权利要求1所述菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)细胞匀浆处理：将菌藻共生球置于无菌预冷研钵中，加入菌藻共生球质量的1～3倍的石英砂和液氮(使菌藻共生球全部浸没在液氮中)后，迅速充分研磨得到细胞匀浆，离心后收集细胞匀浆上清液，备用；

2)将步骤1)得到的细胞匀浆上清液转入离心管，按每5～10×10⁶个细胞加入1mL RNAisolater，静置5～10min；待样品完全融化后，再继续吹打至裂解液透明；

3)将裂解液转移至离心管中，离心，吸取裂解液上清；

4)向步骤3)的裂解液上清中加入500～700μl的氯仿/异戊醇，涡旋混合后，4℃静置10min以上，离心，去除上清液，

5)加入至少1mL 75％乙醇洗涤步骤4)离心后的沉淀，并上下颠倒混匀，室温静置3-5min后，离心，弃去上清；

6)在洁净的环境中室温敞口干燥沉淀2-5min，加入适量的RNase-free ddH₂O溶解沉淀，即可得到总RNA。

3.如权利要求1所述菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，所述菌藻共生球为霉菌与集胞藻、聚球藻、小球藻、蓝丝菌任一一种微藻共生培养形成的菌藻共生球。

4.如权利要求3所述菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，所述菌藻共生球为烟曲霉或青霉与集胞藻Synechcystis sp.PCC6803共生培养形成的菌藻共生球。

5.如权利要求4所述菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，步骤1)中，烟曲霉(Aspergillusfumigatus)，为实验室分离筛选得到的烟曲霉，筛选样本源自广东省阳江市阳东区东平镇柳溪重金属废水水样，其核苷酸序列如SEQ NO.1所示。

6.如权利要求1～5任一项所述菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，步骤1)中，所述菌藻共生球的直径为0.2～0.3cm，单次研磨的菌藻共生球的数量为6～8个。

7.如权利要求2所述的菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，所述石英砂的用量为菌藻共生球的1～1.5倍，单次研磨石英砂的用量为0.05～0.1g。

8.如权利要求2所述的菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，步骤4)中，所述氯仿/异戊醇体积比例为24:1。

9.如权利要求2所述的菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，步骤5)中，所述75％乙醇采用RNase-free ddH₂O配制。

10.如权利要求2所述的菌藻共生球总RNA的提取方法，其特征在于，步骤6)中，RNase-free ddH₂O的用量为30μL。