[发明专利]一种表达11β-HSD1酶突变体的大肠杆菌基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种基于大肠杆菌(Escherichia coli)的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌包含表达编码11β-HSD1酶突变体的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因位于重组表达载体中；优选地，制备所述重组表达载体所用的骨架质粒为pRSFDuet1。

3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的宿主细胞为大肠杆菌BL21。

4.一种生产11β-HSD1酶突变体的方法，其特征在于，通过培养如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌，使其发酵，即得所述11β-HSD1酶突变体。

5.如权利要求4所述的生产11β-HSD1酶突变体的方法，其特征在于，所述发酵包括如下条件中的一种或多种：

(1)培养基为2×YT固体选择培养基；

(2)加入种子液的浓度为1％；

(3)发酵条件为37℃，200rpm振荡培养0.5～2天；

较佳地，所述11β-HSD1酶突变体存在于基因工程菌悬浊液中，所述基因工程菌悬浊液的制备优选包括以下步骤：离心收集所述基因工程菌，洗涤后重悬于PBS缓冲液中；更佳地，所述PBS缓冲液的浓度为0.1M。

6.一种醋酸氢化可的松的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：在如权利要求4或5所述的方法生产的11β-HSD1酶突变体的存在下，将醋酸可的松进行如下所示的还原反应：

即得所述醋酸氢化可的松。

7.如权利要求6所述的醋酸氢化可的松的制备方法，其特征在于，所述的还原反应还包括溶剂；优选地，所述溶剂为PBS缓冲液；更优选地，所述PBS缓冲液的浓度为0.1M；

所述醋酸可的松与所述溶剂的质量体积比为150～800mg/L，例如150mg/L、300mg/L、600mg/L或800mg/L，优选为150mg/L；

和/或，所述还原反应的时间为1～2天；

和/或，所述还原反应以振荡方式进行；优选地，所述振荡的频率为200rpm；

和/或，所述还原反应结束后，还包括继续进行萃取的步骤。

8.如权利要求7所述的醋酸氢化可的松的制备方法，其特征在于，所述的萃取包括以下步骤中的一种或多种：在反应液中加入萃取剂、取有机层、离心和干燥；

所述萃取剂与所述反应液的体积比为1:1；

和/或，所述萃取剂为醇类溶剂和/或含氯有机溶剂，优选为醇类溶剂和含氯有机溶剂的混合溶剂。

9.如权利要求8所述的醋酸氢化可的松的制备方法，其特征在于，所述醇类溶剂为甲醇；所述含氯有机溶剂为氯仿；

和/或，所述醇类溶剂与所述含氯有机溶剂的体积比为1:9。

10.一种如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌在制备醋酸氢化可的松中的应用。