[发明专利]用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合及其应用

权利要求书

1.用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合，其特征在于：所述西瓜橙/黄瓤色的性状控制基因为OYC基因，所述KASP标记引物组合包括如下三条引物：

上游引物1的核心序列：

5'-ggtgaagtttgtgcagagtatgcca-3'；

上游引物2的核心序列：

5'-ggtgaagtttgtgcagagtatgccg-3'；

下游引物的序列：

5'-cttcaattttccatctccaaacacatgtc-3'。

2.根据权利要求1所述的用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合，其特征在于：所述KASP标记引物组合包括如下三条引物：

上游引物F1的序列：

5'-gaaggtgaccaagttcatgctggtgaagtttgtgcagagtatgcca-3'；

上游引物F2的序列：

5'-gaaggtcggagtcaacggattggtgaagtttgtgcagagtatgccg-3'；

下游引物的序列：

5'-cttcaattttccatctccaaacacatgtc-3'。

3.用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：所述应用为用于检测西瓜的橙或黄瓤色性状，包括以下步骤：

(1)提取待测西瓜品种基因组DNA；

(2)使用含有检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合对西瓜基因组DNA进行PCR扩增；

(3)根据PCR荧光信号的差异，利用软件进行分析，进而鉴别出每个待测西瓜的基因型，即鉴定出属于纯合AA、GG，杂合AG基因型的西瓜品种。

4.根据权利要求3所述的用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：

所述PCR扩增：采用的PCR反应体系为：20-100ng/μL西瓜基因组DNA 2.5μL，KASPMaster Mix 2.5μL，Primer mix0.075μL，共5.075μL。

5.根据权利要求4所述的用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：

所述Primer mix：将上游引物1、上游引物2、下游引物分别用ddH₂O稀释到50μM后，再将上游引物1、上游引物2、下游引物按照1:1:3的摩尔浓度比例混合。

6.根据权利要求3所述的用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：所述PCR扩增反应的反应程序为：95℃预变性10min；95℃15s，61℃45s，共10个循环，每个循环降0.6℃；95℃15s，55℃1min，共34个循环。

7.用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：所述应用：培育具有西瓜橙/黄瓤色性状的新植株。

8.根据权利要求书7所述的用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1、以受体亲本P1，与供体亲本P2配制F1代杂交组合；再以受体亲本P1作为轮回亲本进行回交，获得BC1F1代回交分离群体；

步骤2、对所述BC1F1代回交分离群体，采用KASP标记引物组合进行基因型检测，选取基因型为GG的单株继续回交，获得BC2F1代回交分离群体；

步骤3、对所述BC2F1代回交分离群体，采用KASP标记引物组合进行基因型检测，选取基因型为GG的单株，继续回交n代，获得BCnF1代回交分离群体；所述n为3-8的整数；

步骤4、对BCnF1代回交分离群体，采用KASP标记引物组合进行基因型检测，选取基因型为GG的单株自交。

9.根据权利要求书8所述的用于检测西瓜橙/黄瓤色性状的KASP标记引物组合的应用，其特征在于：所述步骤3中，n为4。