[发明专利]用于食用油、厨房油烟和汽车尾气中苯并芘的酶联免疫检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于检测食用油、厨房油烟和汽车尾气中苯并芘的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括样本复溶液、酶结合物/抗体稀释液、标准品稀释液、样本稀释液；

所述样本复溶液为纯甲醇；

所述酶结合物/抗体稀释液的配方为：5-200mmol/L的磷酸缓冲液、0.5-20v％甘油、0.5-10wt％海藻糖、0.5-10wt％山梨醇、0.01-0.5v％防腐剂，还含有0.1-1wt％SG09或0.001-0.3wt％BSA，pH值为7.4；

所述标准品稀释液为：50v％甲醇水溶液、40-332.5nmol/LMg²⁺和0.05-2wt％柠檬酸钠；

所述样本稀释液为：40-665nmol/LMg²⁺和0.05-4wt％柠檬酸钠。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述酶结合物/抗体稀释液的配方中，甘油的浓度为5v％、海藻糖的浓度为1wt％、山梨醇的浓度为2wt％，还含有0.1wt％SG09或0.1wt％BSA，pH值为7.4。

3.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液为50v％甲醇水溶液、80-210nmol/LMg²⁺、0.5-1.4wt％柠檬酸钠；所述样本稀释液为80-416nmol/LMg²⁺、0.8-3wt％柠檬酸钠。

4.根据权利要求3所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液为50v％甲醇水溶液、166.2nmol/LMg²⁺、0.5wt％柠檬酸钠；所述样本稀释液为332.4nmol/LMg²⁺、1wt％柠檬酸钠。

5.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫检测试剂盒的组分还包括苯并芘标准品、苯并芘特异性鼠单克隆抗体、酶结合物、包被有苯并芘抗原的酶标孔板、显色液、终止液、洗涤液。

6.权利要求1～5任一所述的苯并芘酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、待测样本前处理：先将待测样本皂化、再经液液萃取、活化、纯化、洗涤洗脱、干燥；然后使用所述样本复溶液复溶；最后用所述样本稀释液稀释复溶后的待测样本溶液，得到待测液；

S2、将标准品用所述标准品稀释液进行梯度稀释，得到标准品工作液；将步骤S1中的待测液和不同浓度的所述标准品工作液分别加入到包被有苯并芘抗原的酶标孔板的微孔中，再加入酶结合物和抗体工作液，混匀后避光室温孵育；

S3、倒出微孔内的反应液，洗涤、甩干，加入底物，避光室温孵育；

S4、加入终止液终止显色，于450nm波长下15min内读数；

S5、结果分析：根据标准品溶液和相对吸光度值绘制标准曲线，计算加样孔中样品浓度，最后确定待测样品中苯并芘的浓度。

7.根据权利要求6的使用方法，其特征在于，步骤S2中，将标准品用所述标准品稀释液分别稀释至0、0.2、0.6、1.8、5.4μg/L浓度。