[发明专利]用于食用油、厨房油烟和汽车尾气中苯并芘的酶联免疫检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种用于食用油、厨房油烟和汽车尾气中苯并芘的酶联免疫检测试剂盒，包括：样本复溶液、酶结合物/抗体稀释液、标准品/样本稀释液、苯并芘标准品、苯并芘特异性鼠单克隆抗体、酶结合物、包被有苯并芘抗原的酶标孔板、显色液、终止液、洗涤液。本发明还公开了使用所述试剂盒检测食用油、厨房油烟和汽车尾气中苯并芘的方法，包括待测样本前处理、酶联免疫检测、结果处理与分析。本发明提供的样本复溶液、酶结合物/抗体稀释液、标准品/样本稀释液，在保持抗体灵敏度不变的情况下，克服了食用油、厨房油烟和汽车尾气中苯并芘溶解度的问题，还可以显著提高抗体的效价，具有重要的推广应用价值。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种用于检测油脂中苯并芘的酶联免疫试剂盒，其特别适用于食用油、厨房油烟、汽车尾气等含油脂成分的样品中苯并芘的检测。

背景技术

苯并芘，为含苯环的稠环芳烃化合物之一，具有强致癌性。根据苯环的稠合位置不同，苯并芘有多种异构体，常见的有两种是，一种是苯并[a]芘，有致癌性；另一种苯并[e]芘，有强致癌性。一般是由于生产和生活中石油、煤、天然气等燃料的不完全燃烧或者是有机质的高温分解产生，与其他多环芳烃化合物一起广泛的存在于环境中，如空气、水、土壤及沉积物、熏制食物、烧烤和煎炸食物中，汽车尾气也会排放苯并芘到空气中去。目前，作为多环芳烃中毒性最大的一种致癌物质，国家对空气、食品、食用油、油烟以及排放物中苯并芘的限量标准有明确的规定，对其进行严格的监管和控制。因此，对空气、食品、食用油、油烟进行苯并芘含量检测对人类健康极其重要。

目前，针对食用油中苯并芘的检测，基本上都是采用仪器方法：气相色谱-质谱法、高效液相色谱法、液相色谱-荧光检测法。这些检测方法需要大型且昂贵的设备，且操作过程相对复杂，耗时长，需要消耗大量有毒的有机试剂，如二氯甲烷，容易产生大量的有毒废液，因此需要设施较为齐备的实验室才能进行油脂中苯并芘的检测。用于测定苯并芘的方法还有酶联免疫吸附分析法，是一种将抗原-抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合形成的一种综合性技术，具有特异性好，灵敏度高，操作简便快捷的优点。但市面上商品化的苯并芘快检产品较少，绝大多数产品适用范围单一，仅仅适用于水样这种基质成分简单的样本，且检测时间长，前处理除外，检测时长都在1.5小时以上，不适合对大量样品的快速分析和检测。针对食用油这种基质复杂的样本，尚无稳定、快速、可靠的快速检测产品。这是因为苯并芘为5个苯环共面的一个平面刚性结构，为非极性分子，不溶于水，但是非常易溶于食用油中，因此，食用油中苯并芘的检测面临着以下难点：提取净化较为困难；酶联免疫吸附测定、免疫层析检测等免疫检测方法，均需要用到抗原抗体，反应需在水相中进行，因此面临苯并芘难溶于水导致反应灵敏度差，为了解决这一问题，需在体系中引入有机试剂且浓度相对较高；有机试剂的引入会影响快检试剂的稳定性；试剂盒必须配备标准品溶液，而苯并芘在水中不溶，因此需使用纯有机试剂当溶剂，临用前再稀释，否则会面临苯并芘从标准品溶液中析出并吸附在容器壁。

现有技术中，公开的CN105738611A提供了一种用于检测土壤和水中苯并芘残留的酶联免疫试剂盒，水样的基质成分比较简单，比较容易提取出苯并芘。又例如CN115028733A提供了一种水产品如鱼虾蟹中残留的芘和苯并芘的酶联免疫方法和试剂盒。然而，上述这些酶联免疫试剂盒在检测油脂中苯并芘时都面临如下难点：1)油脂的主要成分就是甘油三酯，会阻碍抗体与抗原之间的反应(在微孔表面或蛋白表面形成疏水层，阻碍抗原和抗体的结合或疏水基团插入蛋白内部导致蛋白构象改变)；2)油脂中色素、维生素、萜类化合物等对抗原抗体反应的影响；3)餐厨回收油以及反复煎、炸后的油，由于易引入其他食源性成分，基质成分更复杂；4)对苯并芘溶解性好的有机试剂往往与油脂混溶。同时，上述试剂盒都是针对水样、土壤或者水产品的苯并芘含量的检测，针对油脂中苯并芘的酶联免疫检测缺少研究。苯并芘非常易溶于油脂中，对于食用油、厨房油烟、汽车尾气这类样品不易检测其中的苯并芘含量，这成为了油脂中苯并芘的主要检测难点。因此，如何在兼顾效率、成本、灵敏度以及环境友好的前提下，从油中有效地分离净化苯并芘，剔除上述这些杂质对酶联免疫检测的影响成为了免疫快检方法的一大障碍。

发明内容