[发明专利]用于原发性肝癌早期复发分子诊断的标志物、试剂和试剂盒

说明书

本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，提供用于原发性肝癌早期复发分子诊断的标志物、试剂和试剂盒，所述标志物为HAND2‑AS1基因或者lncBC200基因或者HAND2‑AS1基因与lncBC200基因的组合，所述HAND2‑AS1基因和lncBC200基因的序列参见SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。试剂和试剂盒中含有定量检测HAND2‑AS1基因或者lncBC200基因的PCR引物对。本发明的试剂盒可大幅提高原发性肝癌早期复发诊断的敏感度和特异性，为肝癌的检测提供了一种可靠的方法。

技术领域

本发明涉及肿瘤分子生物学及生物检测技术领域，具体涉及用于原发性肝癌早期复发分子诊断的标志物、试剂和试剂盒。

背景技术

肝癌是全球第六大高发病，是癌症死亡相关第三大恶性肿瘤，其发病率和死亡率近年来呈显著上升趋势。肝癌的复发、转移是临床病人死亡的主要原因，五年存活率只有9％。肿瘤标志物在肿瘤普查、诊断、判断预后、评价治疗疗效和高危人群随访等方面都具有较大的实用价值，是目前肿瘤学研究的关键问题之一。尽管目前有一些肝癌标志物，但常用血清诊断标志物甲胎蛋白(AFP)其敏感性仅在60％左右，特异性为80％。敏感性和特异性均不高，所以到目前为止迫切需要筛选和发现新的早期诊断及预测肝癌预后的分子诊断标志物。

长非编码RNA(lncRNA)是一类新的非编码RNA(200个核苷酸)，近年来的研究表明，lncRNA参与了X染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录激活，转录干扰，核内运输等多种重要的调控过程，lncRNA的这些调控作用已经引起人们广泛的关注。越来越多的肿瘤相关的lncRNAs被发现，这些lncRNAs通过影响肿瘤细胞的生长、凋亡、浸润与转移等成为新的肿瘤标志物和药物靶标的重要来源。lncRNAHULC、lncRNA PVT1、lncRNA ATB、lncRNADANCR、lncRNA HEIH等先后被报道在原发性肝癌组织中差异表达，与肝癌发生发展密切相关，可作为肝癌生物学标志物、预后判断的参考指标。

然而，目前还没有以HAND2-AS1基因、lncBC200基因为标志物进行原发性肝癌早期复发分子诊断的相关报道。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供用于原发性肝癌早期复发分子诊断的标志物、试剂和试剂盒，通过以HAND2-AS1基因和/或lncBC200基因为标志物，可大幅提高原发性肝癌早期复发的敏感度和特异性，为肝癌的检测提供了一种可靠的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

用于原发性肝癌早期复发分子诊断的标志物，所述标志物为HAND2-AS1基因或者lncBC200基因或者HAND2-AS1基因与lncBC200基因的组合，所述HAND2-AS1基因和lncBC200基因的序列参见SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

本发明还提供上述标志物在制备原发性肝癌早期复发分子诊断试剂或试剂盒中的应用。

本发明还提供用于原发性肝癌早期复发分子诊断的试剂，所述试剂是指检测权利要求1所述标志物的表达量的试剂。

进一步地，所述试剂包含标志物基因引物、内参GAPDH基因引物、DNA/RNA标准品、RNA抽提体系、RNA逆转录反应体系和Real-Time PCR反应体系；所述基因引物为HAND2-AS1基因引物或/和lncRNA-BC200基因引物。

进一步地，所述HAND2-AS1基因、lncRNA-BC200基因和内参GAPDH基因的引物序列如下：

HAND2-AS1正向引物：5'-TTGGGCGATTTTGAAGTGCG-3'(SEQ ID NO.4)

HAND2-AS1反向引物：5'-GGTGGAGAGGACTGGTTTCG-3'(SEQ ID NO.5)