[发明专利]一种腈水合酶底物通道氨基酸基序的改造用于肉桂酰胺的制备在审
| 申请号： | 202211369760.0 | 申请日： | 2022-11-03 |
| 公开（公告）号： | CN115772514A | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;程中一;浦卫锋;张广林 | 申请（专利权）人： | 无锡新晨宇生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 水合 酶底物 通道 氨基酸 改造 用于 肉桂 制备 | ||
1.一种腈水合酶突变体，其特征在于，所述腈水合酶包含α亚基和β亚基，以来源于Pseudonocardia thermophila的腈水合酶PtNHase为亲本；所述腈水合酶亲本的α亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述突变体为将β亚基的第37位苯丙氨酸、β亚基的第48位亮氨酸或α亚基的第89位谷氨酰胺中的至少一处进行突变。
2.根据权利要求1所述腈水合酶突变体，其特征在于，所述突变体为将β亚基的第37位突变为脯氨酸或缬氨酸，第48位突变为丙氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸或苏氨酸；所述突变体为将α亚基的第89位突变为半胱氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、缬氨酸。
3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。
4.携带权利要求3所述基因的重组质粒。
5.表达权利要求1或2所述突变体，或含有权利要求3所述基因的宿主细胞。
6.一种重组菌株，其特征在于，表达权利要求1或2所述腈水合酶突变体。
7.一种提高腈水合酶催化活性的方法，其特征在于，所述方法为以来源于Pseudonocardia thermophila的腈水合酶PtNHase为亲本；所述腈水合酶亲本的α亚基的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，β亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述突变体为将β亚基的第37苯丙氨酸、β亚基的第48位亮氨酸或α亚基的第89位谷氨酰胺中的至少一种进行突变。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法为将β亚基的第37位突变为脯氨酸或缬氨酸，第48位突变为丙氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸或苏氨酸，将α亚基的第89位突变为半胱氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、缬氨酸。
9.一种生产肉桂酰胺的方法，其特征在于，以肉桂腈为底物，利用权利要求1或2所述突变体，或权利要求8任一所述重组菌株催化生成肉桂酰胺。
10.权利要求1或2所述突变体，或权利要求3所述基因，或权利要求4所述重组质粒，或权利要求5所述宿主细胞，或权利要求6所述重组菌株在制备肉桂酰胺中的应用。
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