[发明专利]一种催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统及其构建和应用在审
| 申请号： | 202211383805.X | 申请日： | 2022-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN116334156A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 刘洪明;毕超;纵旋;王敖;刘梦娜;刘诗燕;尹夏业;朱国萍 | 申请（专利权）人： | 安徽师范大学 |
| 主分类号： | C12P13/20 | 分类号： | C12P13/20;C12N11/089;C12N9/90;C12N9/88 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 241000 安徽省*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 催化 生成 天冬氨酸 双酶共 固定 系统 及其 构建 应用 | ||
1.一种催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统，其特征在于，所述双酶共固定化系统以金属有机框架为载体，将热稳定双酶AaMaiA和AspB交联到金属有机框架上，所述热稳定双酶AaMaiA和AspB氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示。
2.根据权利要求1所述的催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统，其特征在于，所述热稳定双酶AaMaiA和AspB的编码基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3-4所示。
3.根据权利要求1所述的催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统，其特征在于，所述金属有机框架为NH2-UiO66。
4.一种根据权利要求1所述的催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统的构建方法，其特征在于，优选包括如下步骤：
(1)将ZrCl4和2-氨基对苯二甲酸溶于N,N-二甲基甲酰胺中，然后加入水，混合物在搅拌处理后冷却至室温，洗涤获得沉淀，彻底干燥后可得到NH2-UiO66；
(2)将NH2-UiO666与热稳定双酶AaMaiA和AspB混合后，加入饱和硫酸铵沉淀酶，冰上搅拌，加入交联剂，室温搅拌，沉淀洗涤后得到双酶共固定化系统AaMaiA/AspB@NH2-UiO66。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述热稳定双酶AaMaiA和AspB的质量比为1:4-10:1。
6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，NH2-UiO666与两种酶总载量27.9mgprotein*g-1NH2-UiO66。
7.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述饱和硫酸铵的饱和度为40％～95％。
8.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中交联剂为戊二醛，其在体系中终浓度为0.05％-5％，交联时间为20min-180min。
9.一种权利要求1所述的催化生成天冬氨酸的双酶共固定化系统在马来酸合成L-天冬氨酸中的应用。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用的过程为：反应体系中底物马来酸浓度为20mM，双酶共固定化系统AaMaiA/AspB@NH2-UiO66为30μL，45℃水浴摇床反应15min。
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