[发明专利]检测人EGFR基因第20外显子插入突变的引物探针组合物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202211389188.4 | 申请日： | 2022-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN115725740A | 公开（公告）日： | 2023-03-03 |
| 发明（设计）人： | 王涛;任文静;周焕焕;赵钟毓 | 申请（专利权）人： | 杭州瑞普基因科技有限公司;杭州瑞普医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 egfr 基因 20 外显子 插入 突变 引物 探针 组合 试剂盒 方法 | ||
1.检测人EGFR基因第20外显子插入突变的引物探针组合物，其特征在于，包括探针E20ins-MT-P1、E20ins-MT-P2、E20ins-MT-P3、E20ins-MT-P4、E20ins-MT-P5；其中，
探针E20ins-MT-P1用于检测p.V769_D770insASV突变，序列如SEQ ID NO:4所示；
探针E20ins-MT-P2用于检测p.D770_N771insSVD突变，序列如SEQ ID NO:5所示；
探针E20ins-MT-P3用于检测p.H773_V774insH突变，序列如SEQ ID NO:6所示；
探针E20ins-MT-P4用于检测p.H773_V774insNPH突变，序列如SEQ ID NO:7所示；
探针E20ins-MT-P5用于检测p.D770_N771insG突变，序列如SEQ ID NO:8所示。
2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括检测内参基因的探针E20ins-Ref-P，序列如SEQ ID NO:3所示。
3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括一对引物，其中，上游引物序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物序列如SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，探针E20ins-MT-P1、E20ins-MT-P2、E20ins-MT-P3、E20ins-MT-P4、E20ins-MT-P5的5’端标记有荧光基团FAM。
5.根据权利要求4所述的引物探针组合物，其特征在于，探针E20ins-Ref-P的5’端标记有荧光基团VIC。
6.检测人EGFR基因第20外显子插入突变的试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1-5任一项所述的引物探针组合物。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括有阳性对照样品和/或阴性对照样品。
8.非治疗与诊断目的的检测人EGFR基因第20外显子插入突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S-1.提取样品DNA；
S-2.以样品DNA为模板，利用权利要求1-5任一项所述的引物对探针组合物进行数字PCR扩增；
S-3.对扩增结果进行分析，判定EGFR基因20号外显子是否发生插入突变，若发生突变，计算突变频率。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S-2所采用的数字PCR扩增体系为：
。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤S-2所采用的数字PCR扩增条件为：
。
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