[发明专利]莱氏绿僵菌LAMP检测引物组合物及可视化检测方法

权利要求书

1.一种莱氏绿僵菌的LAMP检测引物组合物，其特征在于：由正向内引物MrFIP，反向内引物MrFIP，正向外引物MrF3，反向外引物MrB3，正向环引物MrLoopF以及反向环引物MrLoopB组成，各引物序列如下：

MrF3：SEQ ID No.1；

MrB3：SEQ ID No.2；

MrFIP：SEQ ID No.3；

MrBIP：SEQ ID No.4；

MrLoopF：SEQ ID No.5；

MrLoopB：SEQ ID No.6。

2.根据权利要求1所述的一种莱氏绿僵菌的LAMP检测引物组合物，其特征在于：所述检测引物组合物根据莱氏绿僵菌的特异性基因β-tubin的序列设计。

3.根据权利要求1所述的一种莱氏绿僵菌的LAMP检测引物组合物，其特征在于：所述检测引物组合物中各引物对的摩尔比为（MrFIP和MrBIP）：（MrF3和MrB3）：（MrLoopF和MrLoopB）=8:1:2。

4.一种莱氏绿僵菌的可视化检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）样品准备：提取待测样品的基因组DNA；

（2）LAMP扩增：利用权利要求1-3任一项所述引物组合物进行LAMP检测；

（3）结果判读：反应结束后取出PCR反应管，观察反应管颜色，黄色表明样品中存在莱氏绿僵菌，红色则表明样品中不存在莱氏绿僵菌。

5.根据权利要求4所述的一种莱氏绿僵菌的可视化检测方法，其特征在于：步骤（1）所述的待测样品为纯化菌株的基因组DNA或土壤样品总DNA。

6.根据权利要求5所述的一种莱氏绿僵菌的可视化检测方法，其特征在于：步骤（1）所述的待测样品的浓度为100 fg/μL以上。

7.根据权利要求4所述的一种莱氏绿僵菌的可视化检测方法，其特征在于：步骤（2）所述的扩增温度为63-65℃，扩增时间为30-40min。