[发明专利]朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测引物、试剂盒及其应用和方法

权利要求书

1.朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测引物组，其特征在于，包括：

序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的外引物对HCRV-NP-F3-1和HCRV-NP-B3-1；

序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的内引物对HCRV-NP-FIP-1和HCRV-NP-BIP-1；

序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的环引物对HCRV-NP-LF-1和HCRV-NP-LB-1。

2.朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括：朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测引物组和RT-LAMP检测试剂；

所述朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测引物组包括：

序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.1所示的外引物对HCRV-NP-F3-1和HCRV-NP-B3-1；

序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的内引物对HCRV-NP-FIP-1和HCRV-NP-BIP-1；

序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的环引物对HCRV-NP-LF-1和HCRV-NP-LB-1。

3.根据权利要求2所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述RT-LAMP检测试剂包括：Mg²⁺、dNTP、甜菜碱、DNA聚合酶、反转录酶、缓冲液。

4.根据权利要求3所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述RT-LAMP检测试剂还包括：无RNA酶水。

5.根据权利要求3所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst 2.0Warm DNA Polymerase；所述反转录酶为M-MLV ReverseTranscriptase。

6.根据权利要求3所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述甜菜碱的浓度为0.6～1.4mmol/μl优选0.8mmol/μl，所述dNTP的浓度为0.2～0.6mmol/μl优选0.2mmol/μl；所述Mg²⁺的浓度为2～8mmol/μl优选6mmol/μl。

7.根据权利要求2所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述内引物对和外引物对的浓度比为3～8:1优选5:1。

8.权利要求1所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测引物组、和/或，权利要求2-7任一所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒在检测朱顶红褪绿环斑病毒方面的应用。

9.一种检测朱顶红褪绿环斑病毒的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测引物组、或权利要求2-7任一所述的朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP检测试剂盒对待测样品进行RT-LAMP。

10.根据权利要求9所述的一种检测朱顶红褪绿环斑病毒的方法，其特征在于，所述RT-LAMP的反应温度为58～68℃优选64℃，反应时间为30-50min优选50min。