[发明专利]一种对7种疟原虫检测并分型的引物探针组合、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种对7种疟原虫检测并分型的引物探针组合，其特征在于，所述7种疟原虫为无性期恶性疟原虫pf-a、有性期恶性疟原虫pf-s、间日疟原虫pv、卵形疟原虫poc亚型、卵形疟原虫pow亚型、三日疟原虫pm、诺氏疟原虫pk；

所述引物探针组合包括：

用于检测人体疟原虫的通用引物和探针fp1、rp1、tp1；

用于区分人体疟原虫型别的引物rp2；

用于区分人体疟原虫型别的探针tp2、tp3、tp4、tp5、tp6、tp7、tp8；

用于区分人体疟原虫型别的熔解曲线引物fp2、fp3、fp4、fp5、fp6、fp7、fp8；

用于监测反应过程的内参基因引物及探针fp9、rp3、tp9；

所述fp1核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述rp1核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示’；

所述tp1核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述tp1的5’标记ROX荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述rp2核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述tp2核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述tp2的5’标记FAM荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述tp3核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述tp3的5’标记FAM荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述tp4核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述tp4的5’标记FAM荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述tp5核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述tp5的5’标记VIC荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述tp6核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述tp6的5’标记VIC荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述tp7核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，所述tp7的5’标记VIC荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述tp8核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述tp8的5’标记VIC荧光素，3’标记MGB荧光猝灭基团；

所述fp2核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

所述fp3核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

所述fp4核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；

所述fp5核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

所述fp6核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；

所述fp7核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；

所述fp8核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

所述fp9核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示

所述rp3核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；

所述tp9核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，所述tp9的5’标记CY5荧光素，3’标记BHQ3荧光猝灭基团。

2.一种对7种疟原虫检测并分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述引物探针组合。

3.根据权利要求2所述对7种疟原虫检测并分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中引物探针反应终浓度为fp1:400nM，rp1:400nM，tp1:300nM，rp2:400nM，tp2:40nM，tp3:30nM，tp4:25nM，tp5:30nM，tp6:25nM，tp7:25nM，tp8:40nM，fp2:400nM，fp3:400nM，fp4:400nM，fp5:400nM，fp6:400nM，fp7:400nM，fp8:400nM，fp9:400nM，rp3:400nM，tp9:300nM。

4.根据权利要求2所述对7种疟原虫检测并分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包含核酸扩增反应液、阳性标准品、空白对照品、TE缓冲液。

5.根据权利要求4所述对7种疟原虫检测并分型的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增反应液包含三羟甲基氨基甲烷、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、dNTP、Taq DNA聚合酶中的一种或多种的混合。