[发明专利]一组检测猪轮状病毒的引物和探针及其应用

权利要求书

1.一组检测猪轮状病毒的引物和探针，其特征在于，包括：

PoRV F2：5'-ATTGTATCTAAAGGTATAGCAGTGACGGAG-3'；

PoRV R：5'-AAATGATACTGGCTTTTGTAGCATGGTTAA-3'；

PoRV Pro：5'-C GCAAAATTGAATTCGTACGCACCAGTTTTATTTAGAGAAACGTCGT-3'；

其中，所述PoRV Pro的5'端标记荧光基团，所述PoRV Pro的第31位碱基替换为四氢呋喃，所述PoRV Pro的3'端标记聚合酶延伸阻断基团。

2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM基团；所述聚合酶延伸阻断基团包括C3-Spacer。

3.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述PoRV R的5'端用生物素标记。

4.一种检测或诊断猪轮状病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的引物和探针。

5.如权利要求1-3任一项所述的引物和探针的应用，其特征在于，包括如下任一项：

(1)在制备检测猪轮状病毒的试剂盒中的应用；

(2)在制备诊断猪轮状病毒感染情况的试剂盒中的应用。

6.一种非疾病诊断目的的检测猪轮状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以待测样品的RNA或DNA为模板，利用权利要求1-3任一项所述的引物和探针扩增，通过扩增产物判定是否为猪轮状病毒。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，扩增反应体系包括：PoRV F2 2μL、PoRV R 2μL、PoRV Pro 0.6μL、RNA模板5μL，补充至50μL。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，扩增反应程序为：37℃孵育反应15min。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述检测包括电泳检测或者侧层析试纸条检测。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，采用侧流层析检测时，若试纸条出现两条红色的带，一条位于质控区，一条位于检测区，表明待测样品中含有猪轮状病毒或达到了试纸条的最低检出量；

若试纸条质控区出现一条红色带，检测区没有条带，表明待测样品中不含有猪轮状病毒或低于试纸条最低检出量；

若试纸条质控区和检测区均未出现条带，说明使用的试纸条或者扩增试剂损坏、失效或者操作有误。