[发明专利]一种胸苷激酶1磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种胸苷激酶1磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，包括：包被有抗TK1抗体的磁微粒悬液，吖啶酯标记的抗TK1检测抗体的检测试剂，TK1校准品和TK1质控品。本发明使用TK1抗体‑磁微粒偶联物结合并分离TK1蛋白，TK1配对抗体‑吖啶酯发光剂发光，建立了一种TK1磁微粒化学发光检测方法；其可以实现在通用全自动化学发光分析仪上对TK1的简便快速检测，具有高灵敏度、高特异性、操作耗时短、高精密度、准确等优势，并能有效降低TK1检测人力和时间成本，有利于摆脱仅限实验室应用，而可放大到临床推广使用。

技术领域

本发明属于生物试剂技术领域，涉及一种检测试剂盒，具体涉及一种胸苷激酶1磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)是细胞增殖周期中嘧啶补救合成途径的关键酶之一，是一种新的细胞增殖特异性的标志物，可用于评估细胞分裂增殖周期，在肿瘤的早期筛查、肿瘤分期评估、治疗效果监测和预后评价中的作用日益受到关注。通常正常人的TK1水平平均值在1pM左右，具体值取决于个体差异，但是总的来说处于0-2pM之间。对于异常增殖类病变，由于病变细胞缺失了凋亡调控，DNA合成剧增会导致TK1水平的异常升高，即存在恶性增殖病变患者血清内TK1酶含量会比正常人有2-200倍的升高。因此TK1目前也被作为一种非特异性肿瘤标志物，应用于体检及临床中的恶性增殖病变筛查和治疗后的跟踪监测。TK1水平检测在监测乳腺癌、肺癌、胃癌等恶性实体瘤的监控方面应用价值较高。作为一种优选评估肿瘤细胞增殖速率的标志物，TK1在健康人血清含量极微或检测不到，但其在恶性肿瘤患者体内随着肿瘤细胞的急剧增殖而升高。因此，建立一种高效灵敏、简便快捷的TK1检测技术具有很重要的现实意义。

目前，常用测定样本中TK1含量的方法还是以酶联免疫法为主，该法仍以手工操作或半自动操作为主，比较费时费力，且对结果影响较大，同时其检测的灵敏度和线性范围也较低，仍是用于实验室分析为主，在临床的检测应用上具有较大局限性，效率低，仍无法满足临床日益增长的需求。而化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)是将化学发光技术与免疫分析方法相结合的一种新型分析方法，其具有高灵敏度、强特异性、操作简便快捷等优点，在多个检测领域得到了广泛应用。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种胸苷激酶1磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

本发明公开了一种胸苷激酶1磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：

包被有抗TK1抗体的磁微粒悬液；

吖啶酯标记的抗TK1检测抗体的检测试剂；

TK1校准品；

TK1质控品。

作为本发明的进一步改进，所述包被有抗TK1抗体的磁微粒悬液由磁微粒标记的TK1抗体结合物、0.05-0.15mol/L的Tris-HCl缓冲液、0.5％-1.5％氯化钠、1.5％-2.5％牛血清白蛋白、3％-5％海藻糖、0.025％-10.075％表面活性剂和0.1％-0.5％防腐剂配制而成。

作为本发明的进一步改进，所述磁微粒标记的TK1抗体结合物所选择的磁微粒为经1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化后的磁微粒，所述磁微粒表面的活性功能基团选自对甲苯磺酰基或羧基，所述磁微粒的粒径为0.1-10μm。

作为本发明的进一步改进，所述吖啶酯标记的抗TK1检测抗体的检测试剂由吖啶酯标记的抗TK1检测抗体结合物、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液、0.25％-0.75％酪蛋白、0.025％-10.075％表面活性剂、3％-5％海藻糖和0.1％-0.5％防腐剂配制而成。