[发明专利]一种分步酶解法提取牛血红蛋白抗氧化肽的方法

权利要求书

1.一种牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将牛血离心分层，弃去上层血浆，用生理盐水洗涤红血球，继续离心去除生理盐水，生理盐水重复洗涤，使红血球充分破胞，离心收集上清液为血红蛋白液；

(2)将所述血红蛋白液用风味蛋白酶酶解，酶解后灭酶处理，再加入碱性蛋白酶酶解，酶解后再灭酶处理，冷却至室温；

(3)离心去除杂质，收集上清液，即获得牛血红蛋白的酶解液；

(4)将牛血红蛋白酶解液进行冷冻干燥，得到牛血红蛋白抗氧化肽。

2.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述离心时间为5-20min，优选的，步骤1中所述离心时间为10min。

3.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述离心力为4000～6000g。

4.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)采用冻融法使红血球充分破胞，优选的，冻融条件为-20℃～-80℃。

5.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，风味蛋白酶酶解条件为血红蛋白液浓度40～50g/L，酶解温度50～55℃，风味蛋白酶的添加量4000～5000U/g，pH7.5～8.0，时间120～300min；优选的，血红蛋白液浓度40～45g/L；优选的，风味蛋白酶的添加量3800U/g；优选的，时间120～180min，进一步优选的，时间130min。

6.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，碱性蛋白酶酶解条件为酶解温度40-45℃，碱性蛋白酶的添加量2000～3000U/g，pH9～10，时间60-90min；优选的，步骤(2)中，碱性蛋白酶酶解条件为酶解温度40℃；优选的，步骤(2)中，碱性蛋白酶酶解时间60min；优选的，碱性蛋白酶酶添加量2900U/g。

7.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述灭酶处理为采用沸水浴法进行灭酶处理，灭酶处理时间为10～20min。

8.根据权利要求1所述的牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，离心时间为10～15min；离心条件为3000～5000g。

9.一种牛血红蛋白抗氧化肽，其特征在于，采用权利要求1至8任一项权利要求制备的所述牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法制备得到。