[发明专利]一种分步酶解法提取牛血红蛋白抗氧化肽的方法

说明书

本发明公开了一种牛血红蛋白抗氧化肽及其制备方法。所述方法包括以下步骤：(1)将牛血离心，弃去上层血浆，用生理盐水洗涤红血球后继续离心，重复洗涤两次，冻融法使红血球充分破胞，离心收集上清液为血红蛋白液。(2)将所述血红蛋白液用风味蛋白酶酶解，酶解后沸水浴灭酶，再加入碱性蛋白酶酶解，酶解后再沸水浴灭酶，冷却至室温。(3)离心取上清液，获得牛血红蛋白的酶解液。(4)将牛血红蛋白酶解液进行冷冻干燥后，得到牛血红蛋白抗氧化肽。该方法制得的牛血红蛋白肽抗氧化能力强，可应用于食品、制药、饲料等领域。本发明既为牛血资源的利用提供了新用途，又对天然抗氧化剂的开发与应用具有重要意义。

技术领域

本发明涉及抗氧化肽领域，尤其涉及一种分步酶解法提取牛血红蛋白抗氧化肽的方法。

背景技术

近年来，随着人口的快速增长以及自然资源的匾乏，传统蛋白源已经难以满足需要，开发利用新型蛋白源十分必要。在肉类屠宰加工过程中所产生的动物血液，是一种珍贵的蛋白质资源，可以广泛应用于食品、制药、饲料、化妆品以及工业等领域。但目前只有小部分血液被应用，综合利用率不足30％，大部分废弃血液被直接排放到环境中，既造成了资源浪费，又引起了环境污染。

2021年，我国肉牛总出栏量约为4707万头，较2020年同比增长3.1％，牛血产量约为94万吨。按照牛的放血量约为75％计算，2021年我国可收集牛血总量高达70万吨。但其中被真正加以利用的血液却非常少。因此，为了减少蛋白质资源的浪费和对环境的污染，探索新的血液资源利用途径，进一步提高动物血液的利用率具有重要意义。

近年来，许多研究者从不同的原料中分离纯化出多种生物活性肽。活性肽具有特异性高、毒性低等优点，在长期服用的治疗中极具潜力。抗氧化肽是活性肽中的一种，它能够有效清除自由基，减少人体由自由基引起的蛋白质变性、脂质过氧化，降低关节炎、糖尿病、高血压等多种疾病风险。现有研究有CN114410723A《一种具有良好乳化性的豌豆抗氧化肽及其制备方法》分别加入碱性蛋白酶、胃蛋白酶和风味蛋白酶进行单独酶解，得到具有良好乳化性的豌豆抗氧化肽。CN114591402A《一种辣木抗氧化肽及其制备方法和应用》以辣木蛋白为原料，采用碱性蛋白酶进行酶解得到辣木蛋白酶解液，再经分离纯化得到辣木抗氧化肽。采用枯草芽孢杆菌联合碱性蛋白酶制备出具有体外抗氧化活性的牦牛血抗氧化肽，再利用Sephadex G-25凝胶层析法纯化得到高抗氧化性肽。

牛血红蛋白作为牛血中含量最为丰富的蛋白质，经酶解后生成的小分子抗氧化肽，既有利于人体的消化吸收，还具有功能特性。由此开发牛血红蛋白制品和功能性食品，既提高了牛血的经济价值，又解决了牛血排放造成的资源浪费和环境污染问题。

但目前，尚未报道分步酶解牛血红蛋白制备抗氧化肽及其抗氧化活性的相关研究。本发明针对这一问题进行研究，希望通过分步酶解法生产抗氧化能力更强的活性肽。

发明内容

针对上述背景技术所提出的问题，本发明的目的是：旨在提供一种牛血红蛋白抗氧化肽及其制备方法。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个目的时提供一种牛血红蛋白抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)将牛血离心分层，弃去上层血浆，用生理盐水洗涤红血球，继续离心去除生理盐水，生理盐水重复洗涤，使红血球充分破胞，离心收集上清液为血红蛋白液；

(2)将所述血红蛋白液用风味蛋白酶酶解，酶解后灭酶处理，再加入碱性蛋白酶酶解，酶解后再灭酶处理，冷却至室温；

(3)离心去除杂质，收集上清液，即获得牛血红蛋白的酶解液；

(4)将牛血红蛋白酶解液进行冷冻干燥，得到牛血红蛋白抗氧化肽。

进一步的，步骤(1)中所述(牛血/红血球)离心时间为5-20min，优选的，步骤1中所述(牛血/红血球)离心时间为10min。