[发明专利]一种用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统

权利要求书

1.一种用于治疗杜氏肌营养不良症(DMD)的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述CRISPR-Cas9系统包含：将发生在DMD基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3N-1)的错误读码框纠正为(3N)恢复通读gRNA、敲除DMD基因27号外显子的gRNA、以及跳跃DMD基因27号外显子使外显子26和28连在一起恢复通读的gRNA中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，将发生在DMD基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3N-1)的错误读码框纠正为(3N)恢复通读gRNA靶序列选自SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:12中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，将发生在DMD基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3N-1)的错误读码框纠正为(3N)恢复通读gRNA靶序列选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12中的至少一种。

4.根据权利要求2所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述gRNA由靶序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中的一种和靶序列如SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：10中的一种进行组合，将发生在DMD基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3N-1)的错误读码框纠正为(3N)恢复通读gRNA。

5.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述用于敲除DMD基因27号外显子的gRNA靶序列选自SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13-SEQID NO：17中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述用于敲除DMD基因27号外显子的gRNA是靶序列如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15中的一种；和靶序列如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：16中的一种进行组合。

7.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述跳跃DMD基因27号外显子的跳跃位点位于剪接受体5A处。

8.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述通过跳跃DMD基因27号外显子gRNA靶序列选自SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述CRISPR-Cas9还包括表达载体和Cas9蛋白，所述表达载体为AAV载体；所述Cas9蛋白为SpCas9、SaCas9、SauriCas9或nCas9蛋白。

10.如权利要求1-9任一所述的CRISPR-Cas9系统在制备用于预防或治疗杜氏肌营养不良症的药物中的用途。