[发明专利]lobophorins N1-N3及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了抗生素lobophorin E和lobophorins N1‑N3及其制备方法和应用。本发明构建了工程菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127/ΔlobP1，可从该菌株的发酵培养物中大量获得已知化合物lobophorin E(1)和新化合物lobophorins N1‑N3(2‑4)。Lobophorin E具有抗肿瘤活性，为开发抗肿瘤新药提供了候选化合物；lobophorins N1‑N3具有抗菌活性，可用于制备抗菌药物。

技术领域：

本发明属于工业微生物领域，具体涉及新的抗生素lobophorins N1-N3(2-4)和已知抗生素lobophorin E(1)及其制备方法和应用。

背景技术：

Lobophorins为螺环乙酰乙酸内酯类抗生素，具有抗菌、抗肿瘤、抗炎症等多种生物活性。lobophorin E为已知的lobophorins家族化合物，具有抗菌作用。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供3个新的螺环类抗生素lobophorins N1-N3(2-4)及大量获得已知化合物lobophorin E(1)的方法。

Lobophorins N1-N3是具有新颖结构的lobophorins家族化合物，本研究通过基因敲除的手段对lobophorins生物合成基因簇中P450羟化酶基因lobP1进行敲除获得足量的已知化合物lobophorin E以及三个新的lobophorins家族化合物lobophorins N1-N3，并对这些化合物进行了抗菌和抗肿瘤活性研究。

本发明的3个新的螺环类抗生素lobophorins N1-N3(2-4)和已知化合物lobophorin E(1)，其结构如式(I)所示：

本发明的第二个目的是提供一种工程菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127/ΔlobP1的构建方法，其是将菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127中lobophorin生物合成基因簇中P450羟化酶基因lobP1敲除后得到基因工程菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127/ΔlobP1。

本发明的第三个目的是提供一种制备抗生素lobophorins N1-N3和lobophorin E的方法，其特征在于，化合物lobophorins N1-N3和lobophorin E是从工程菌株Streptomyces sp.SCSIO01127/ΔlobP1的发酵培养物中制备分离得到的。

优选，具体步骤为：

a、制备工程菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127/ΔlobP1的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分开；发酵液经大孔树脂XAD-16吸附，后用丙酮洗脱，减压浓缩回收丙酮，剩余的水相用丁酮萃取，再减压浓缩至干得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，减压浓缩回收丙酮，剩余的水相用丁酮萃取，减压浓缩至干得到浸膏B；将浸膏A和浸膏B合并得到粗提物，由此得到工程菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127/ΔlobP1的粗提物；

将工程菌株Streptomyces sp.SCSIO 01127/ΔlobP1的粗提物经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇从体积比为1:0、4:1、2:1和0:1梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比为4:1的馏分Fr.2，馏分Fr.2经Sephdex LH-20凝胶柱分离，以氯仿/甲醇体积比1:1等度洗脱，洗脱馏分经纯化得到化合物lobophorin N1、化合物lobophorin N2、化合物lobophorin N3和化合物lobophorin E。