[发明专利]腺病毒包装用系统、应用及腺病毒包装方法

权利要求书

1.一种腺病毒包装用系统，其特征在于，所述系统包括表达载体、供体质粒和腺病毒；

其中，所述表达载体能够表达Cas9、sgRNA1、sgRNA2；

所述供体质粒由5’-3’端依次含有反向末端重复序列、包装信号、启动子和目的基因，并且不含有转录终止信号；

所述腺病毒基因组含有外源基因表达盒；

所述sgRNA1的识别位点位于腺病毒的基因组的5’端的反向末端重复序列和包装信号之间；

所述sgRNA2的识别位点位于(a)腺病毒基因组所携带外源基因表达盒的启动子和终止信号之间，以及(b)供体质粒的目的基因的3’端。

2.根据权利要求1所述的系统，其中，所述供体质粒还含有荧光蛋白基因，所述供体质粒的荧光蛋白基因为TagRFP基因、RFP基因、mcherry基因、YFP基因中的至少一种；

和/或，所述包装信号为包装信号Ψ。

3.根据权利要求2所述的系统，其中，所述供体质粒的荧光蛋白基因与目的基因融合表达。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的系统，所述腺病毒的基因组还含有荧光蛋白基因，所述腺病毒基因组的荧光蛋白基因为GFP基因、eGFP基因、coGFP基因中的至少一种；

其中，所述腺病毒基因组的荧光蛋白基因位于腺病毒组所携带外源基因表达盒的启动子和终止信号之间；

其中，所述sgRNA2的识别位点位于腺病毒基因组的荧光蛋白基因上。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的系统，其中，所述腺病毒为ADV-GFP腺病毒。

6.根据权利要求5所述的系统，其中，所述sgRNA1识别位点位于ADV-GFP腺病毒基因组的腺病毒的基因组的5’端的反向末端重复序列和包装信号Ψ之间，所述sgRNA2识别位点位于ADV-GFP腺病毒基因组的GFP基因上。

7.权利要求1-6中任意一项所述的系统在腺病毒包装中的应用。

8.一种使用权利要求1-6中任意一项所述的系统进行腺病毒包装的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将表达载体转染至宿主细胞中并获得稳定细胞株；

(2)将供体质粒和腺病毒转至步骤(1)得到的稳定细胞株中。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述宿主细胞为HEK 293细胞。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，所述步骤(2)包括：先使用供体质粒转染所述稳定细胞株，再将腺病毒感染所述稳定细胞株。