[发明专利]一种PLGA@M2纳米药物及其在制备治疗或清除血液炎症药物中的应用

说明书

本发明提供一种PLGA@M2纳米药物及其在制备治疗或清除血液炎症药物中的应用。本发明通过在RAW细胞膜上过表达IL1R,IL6R和TNFR膜蛋白，并用IL‑4和IL‑13诱导RAW极化为M2，然后用极化为M2并过表达炎症受体的巨噬细胞膜包裹PLGA合成了PLGA@M2纳米药物。该纳米药物可通过体内注射精准靶向吸附血液中常见的三种炎症因子，治疗体内血液炎症风暴。同时，本发明通过将PLGA@M2纳米药物加载于体外吸附柱中，可清除透析患者血液中的炎症，为透析患者全身性炎症提供可行性防治措施。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种PLGA@M2纳米药物及其在制备治疗或清除血液炎症药物中的应用。

背景技术

炎症被认为是慢性肾脏病(Chronic kidney disease，CKD)常见的共病，尤其是在慢性透析患者中，几种循环标记物通常被评估为全身性炎症的指标。IL-1β是急性和慢性炎症的促炎介质，可诱导数百种继发炎症介质的合成。IL-6是一种促炎细胞因子，通过激活和增殖淋巴细胞、B细胞分化、白细胞募集和诱导急性期反应蛋白来促进炎症。TNF-α是一种主要由单核和巨噬细胞产生的可溶性受体，位于IL-6的下游，是易损性斑块和心血管事件风险的特异性标志物，并在动脉粥样硬化发生中发挥直接作用。

巨噬细胞是一种异质性极强的可塑性细胞，不仅在生理条件中发挥重要作用，而且在炎症过程中发挥重要作用(包括炎症的起始和消退)。巨噬细胞有两种不同表型:一种称为经典促炎巨噬细胞(M1)，另一种称为抗炎巨噬细胞(M2)。极化的M2具有重要的治疗价值，尤其是在抗炎中发挥着重要作用。

PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜性能，被视为优良的医用材料，受到广泛研究，包括药物递送、抗体制备、一瞄佐剂等。目前，FDA已经批准了多种基于PLGA微球的药物制剂进入临床，如LupronDeport等。2009年，中国SFDA也批准了2种可注射性的微球药物制剂上市。

如何研制出一种安全、可用于静脉注射的纳米药物来治疗缺血性低血压或心血管手术引起的肾脏损伤恢复不良造成的炎症性疾病，精准靶向吸附血液中常见的IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子，一直是医药科研工作者苦思冥想的领域。

而且，在目前血液透析治疗方法中，除了干预透析患者炎症产生外，如何在血液透析过程中，迅速降低、清除透析患者血液中的炎症，是一个新的治疗策略。

发明内容

有鉴于此，为了克服现有技术的不足，本发明提供一种PLGA@M2纳米药物及其在制备治疗或清除血液炎症药物中的应用。

本发明提供的一种PLGA@M2纳米药物，所述PLGA@M2纳米药物由M2巨噬细胞膜包裹PLGA颗粒形成，所述M2巨噬细胞膜上过表达IL1R,IL6R和TNFR炎症受体膜蛋白。

本发明还提供上述PLGA@M2纳米药物的制备方法，所述方法包括步骤：

1)在RAW细胞中上过表达IL1R,IL6R和TNFR；

2)IL-4和IL-13诱导所述过表达IL1R,IL6R和TNFR RAW的细胞极化为M2；

3)收集所述极化为M2的RAW细胞，冷冻后解冻，离心，提取细胞膜；

4)将所述提取的细胞膜与PLGA混合，获得所述的M2巨噬细胞膜包裹PLGA颗粒的PLGA@M2纳米药物。

进一步，所述步骤3)所述极化为M2的RAW细胞-80℃冷冻10-30min后解冻，4℃5000-14000rmp 10min重复5次，弃上清，加入0.1-1ml PBS，超声打碎细胞膜，得到含有细胞膜的溶液，测定所述含有细胞膜溶液的蛋白浓度。

进一步，所述步骤4)所述细胞膜与PLGA的质量摩尔比为0.1-1ug/ml：0.5-5mol/ml。