[发明专利]一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法

说明书

本发明涉及中药材质量检测技术领域，尤其是涉及一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，该方法采用UPLC‑MS/MS测定甘草中兰蓟定及其N‑氧化物、千里光碱及其N‑氧化物、野百合碱及其N‑氧化物、倒千里光碱及其N‑氧化物、春千里光碱及其N‑氧化物、千里光宁碱及其N‑氧化物、千里光菲灵碱及其N‑氧化物、欧天芥菜碱及其N‑氧化物、天芥菜碱及其N‑氧化物、促黑激素、克氏千里光碱、芝麻菜叶千里光碱和石松胺N‑氧化物。本发明提供的一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法能够为甘草的质量评价及安全评价提供技术支持。

技术领域

本发明涉及中药材质量检测技术领域，尤其是涉及一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法。

背景技术

甘草是豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的根或茎，是中国传统地道的中药材，最早记载于《神农本草经》。甘草味甘平，具有补脾益气、清热解毒以及祛痰止咳等功能活性。近年来，甘草提取物作为添加剂被广泛用于烟草、医药、食品、化妆品等行业，目前对其研究最多的是三萜皂苷类化合物、甘草黄酮、香豆素类、甘草多糖等活性成分，表现出抗氧化、抗肿瘤以及调节糖脂代谢等多种生物活性。

吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids，PAs)是菊科、紫草科、豆科、夹竹桃科和兰科等植物为了抵御昆虫及草食性动物采食、病原微生物侵袭而产生并积累的一类次生代谢产物。目前已从6000多种植物中鉴定出660多种不同结构的PAs及其氮氧化物(PANOs)。PAs一般由次碱(如千里光次碱，necine)和次酸(如千里光次酸，necic acid)2个基本部分组成，按次碱类型可分为倒千里光裂碱(retronecine)型、奥索千里光裂碱型(otonecine)型和阔叶千里光裂碱(platynecine)型。倒千里光裂碱型和奥索千里光裂碱型PAs在1、2位碳原子上形成双键，为不饱和型，阔叶千里光裂碱型PAs为饱和型。不饱和PAs根据酯化方式又可分为单酯、开链二酯或环状二酯三种类型。PAs在生物学和毒理学上是无活性的前毒素，但当其进入体内，不饱和PAs会被代谢形成烯丙醇酯结构的吡咯代谢物，并与各种亲核性的酶、蛋白质和DNA结合，表现出肝毒性、肺毒性、遗传毒性、致癌性和发育毒性等健康问题。由于PAs在不同类型食品中的广泛存在及其对人类健康的潜在风险，其食品安全问题已引起重视，但中药材以及其他食品原料性质差异较大，目前缺乏针对常用中药材中PAs含量的高效检测方法。因此，提供一种测定甘草中PAs的方法，能够同时精确测定甘草中的PAs含量，对深入了解甘草的安全性具有重要的意义。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，该方法采用UPLC-MS/MS测定甘草中兰蓟定(Echimidine，Em)及其N-氧化物(EmN)、千里光碱(Jacobine，Jb)及其N-氧化物(JbN)、野百合碱(Crotaline，Mc)及其N-氧化物(McN)、倒千里光碱(Retrorsine，Re)及其N-氧化物(ReN)、春千里光碱(Senecivernine，Sv)及其N-氧化物(SvN)、千里光宁碱(Senecionine，Sc)及其N-氧化物(ScN)、千里光菲灵碱(Seneciphylline，Sp)及其N-氧化物(SpN)、欧天芥菜碱(Europine，Eu)及其N-氧化物(EuN)、天芥菜碱(Heliotrine，Hn)及其N-氧化物(HnN)、促黑激素(Intermedine，Im)、克氏千里光碱(Senkirkine，Sk)、芝麻菜叶千里光碱(Erucifoline，Er)和石松胺N-氧化物(Lycopsamine N-oxide，LaN)。本发明提供的检测方法能够为甘草的质量评价及安全评价提供技术支持。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种测定甘草中吡咯里西啶生物碱的方法，包括以下步骤：

(1)混合标准品的制备：将不同标准品溶解后混匀得到不同浓度的混合标准品；