[发明专利]一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法及应用

说明书

本发明涉及干细胞培养技术领域，提出了一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法及应用。所述一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法，包括以下步骤：S1、大鼠颌下腺脱细胞处理得到脱细胞颌下腺基质；S2、将所述脱细胞颌下腺基质冻干得到冻干支架；S3、将所述冻干支架体外接种牙髓干细胞得到牙髓干细胞‑支架复合体；S4、将所述牙髓干细胞‑支架复合体与牙根切片构建组织工程复合体。通过上述技术方案，解决了相关技术中的牙髓组织获取来源少、组织获取及操作复杂问题。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，具体指，涉及一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法及应用。

背景技术

牙髓是一种复杂的、包含有多种细胞类型的、高度血管化和受神经支配的结构高度有序组织。牙髓功能与其微环境生态位密切相关，天然牙髓细胞外基质维持牙髓组织的结构完整性，并在牙髓发育、修复和再生中发挥重要作用。

牙髓干细胞被认为是再生牙科中很有前途的细胞群，并且已被证明在体内植入后可产生牙髓-牙本质样组织，除此之外，牙髓干细胞还具有神经元和内皮细胞分化潜能。

天然组织来源的细胞外基质由于其高生物活性及组织特异性被认为是牙髓组织再生的理想支架，与其他生物材料相比存在固有的优势。生物组织的去细胞化降低了免疫原性，保留了原始的脉管结构，允许细胞重新增殖，从而提高植入后的长期性能稳定。脱细胞的人类和动物组织已被广泛用于组织工程，已经证明在再生医学应用中使用脱细胞支架可促进血管形成并为干细胞分化提供指导环境。在牙科领域，已经报告了脱细胞人牙髓、猪牙髓以及牛牙髓支架体内再生功能性牙髓组织，但是，牙髓组织获取来源十分有限，其体量难以满足牙髓再生对支架材料的需求，另外，大量生物材料的长期储存和运输临床应用具有挑战性。

脱细胞人牙髓细胞外基质由于体积小和来源有限严重限制了在实际治疗应用中的可行性，尽管异种来源的猪、牛脱细胞牙髓基质部分解决了这个问题，但其属于大型动物，且组织获取及操作相对复杂。此外，再生功能性牙髓组织形成是牙髓治疗的最终目标，目前通过组织工程再生牙髓的方法尚未应用于临床。确保充足的血液供应，以维持再生过程中组织工程构建体内细胞的活力和功能，仍然是一个挑战。因此，探索新型的相对易获取的支架支持干细胞的附着与生长、制定构建体体内植入后促血管化的策略和实现牙髓牙本质复合体功能性再生对于未来的临床转化有重要意义。

发明内容

本发明提出一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法及应用，解决了相关技术中的牙髓组织获取来源少、组织获取及操作复杂问题。

本发明的技术方案如下：

一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法，包括以下步骤：

S1、大鼠颌下腺脱细胞处理得到脱细胞颌下腺基质；

S2、将所述脱细胞颌下腺基质冻干得到冻干支架；

S3、将所述冻干支架体外接种牙髓干细胞得到牙髓干细胞-支架复合体；

S4、将所述牙髓干细胞-支架复合体与牙根切片构建组织工程复合体。

作为进一步的技术方案，所述S1中大鼠颌下腺脱细胞处理包括以下步骤：将颌下腺经去离子水、表面活性剂多次洗涤后酶消，并再次洗涤，灭菌后备用。

作为进一步的技术方案，所述表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或两种。

作为进一步的技术方案，所述S2中脱细胞颌下腺基质冻干包括以下步骤：将脱细胞颌下腺基质洗涤后经培养基浸泡，进行预冻、冷冻干燥，得到冻干支架。

作为进一步的技术方案，所述预冻时温度为-80℃，时间为2h，所述冷冻干燥时真空压力为0.07mbar，冷阱温度为-51℃，时间为24h。