[发明专利]一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法及系统

权利要求书

1.一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，包括：

基于单因素试验方法和正交试验法，确定TAME法的多个最优实验条件，所述实验条件包括试剂添加量和反应时间；

建立甲醇含量与吸光度的标准曲线；

从待测纳豆干中提取具备酶活性的样品粗酶液；

基于多个最优实验条件，对样品粗酶液进行TAME法实验；待试验结束后，通过标准曲线计算待测纳豆干的酶活性含量。

2.根据权利要求1所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述基于单因素试验方法和正交试验法，确定TAME法的多个最优实验条件包括：

确定影响甲醇含量与吸光度的多个因素；

基于单因素试验方法对每个因素进行变量控制，并确定每个因素的最优实验条件的变量区间；

基于每个因素的变量区间，确定正交试验的多个组合实验条件。

3.根据权利要求2所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述多个因素包括三氯乙酸、高锰酸钾、无水亚硫酸钠和变色酸的用量，以及沸水浴反应时间。

4.根据权利要求3所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述基于每个因素的变量区间，确定正交试验的多个组合实验条件包括：

将三氯乙酸、高锰酸钾、变色酸用量和沸水浴时间作为控制变量，进行正交试验。

5.根据权利要求1所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述待试验结束后，通过标准曲线计算待测纳豆干的酶活性含量包括：

根据甲醇含量与吸光度的标准曲线，计算待测纳豆干的甲醇含量；

根据甲醇含量和TAME法，计算待测纳豆干的酶活性含量。

6.根据权利要求5所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述根据甲醇含量和TAME法，计算待测纳豆干的酶活性含量通过如下步骤实现：

TAME＝(X×V1/m1×t)×V2/m2，

其中，TAME表示豆干的酶活性含量，X表示甲醇含量，V1表示稀释倍数，V2表示样品粗酶液提取体积；t表示NK与TAME底物反应的时间；m1表示NK样品溶液的浓度，m2表示样品称取质量。

7.根据权利要求1至6任一项所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述建立甲醇含量与吸光度的标准曲线包括：

量取预设的多种浓度的甲醇标准溶液；

利用氧化剂分别每种浓度的甲醇标准溶液进行氧化；将氧化产物与变色酸溶液混合，并置于沸水浴中预设时间发生显色反应；

利用紫外分光光度计在波长574nm下，测量每种浓度甲醇标准溶液的吸光度值。

8.根据权利要求1至6任一项所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，其特征在于，所述多个最优实验条件为：2.5mL三氯乙酸、0.05mL高锰酸钾和无水亚硫酸钠、5.5mL0.1％变色酸含量在沸水浴35分钟。

9.一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测系统，其特征在于，包括：

确定模块，用于基于单因素试验方法和正交试验法，确定TAME法的多个最优实验条件，所述实验条件包括试剂添加量和反应时间；

建立模块，用于建立甲醇含量与吸光度的标准曲线；

提取模块，用于从待测纳豆干中提取具备酶活性的样品粗酶液；

计算模块，用于基于TAME法的多个最优实验条件，对样品粗酶液进行实验，待试验结束后，通过标准曲线计算待测纳豆干的酶活性含量。

10.根据权利要求9所述的纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测系统，其特征在于，所述确定模块包括：

第一确定单元，用于确定影响甲醇含量与吸光度的多个因素；

第二确定单元，用于基于单因素试验方法对每个因素进行变量控制，并确定每个因素的最优实验条件的变量区间；

第三确定单元，用于基于每个因素的变量区间，确定正交试验的多个组合实验条件。