[发明专利]一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法及系统

说明书

本发明涉及一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法及系统，其方法包括：基于单因素试验方法和正交试验法，确定TAME法的多个最优实验条件，所述实验条件包括试剂添加量和反应时间；建立甲醇含量与吸光度的标准曲线；从待测纳豆干中提取具备酶活性的样品粗酶液；基于多个最优实验条件，对样品粗酶液进行TAME法实验；待试验结束后，通过标准曲线计算待测纳豆干的酶活性含量。本发明通过对TAME法进行改进和优化，使得纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法成本低、时间短、操作简单、准确度高、结果易于观察记录。

技术领域

本发明属于车辆辅助驾驶技术领域，涉及一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法及系统，具体涉及一种基于TAME法测定纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法及系统。

背景技术

纳豆激酶(NK)的活性检测可以从两方面进行，一是利用纳豆激酶自身强大的溶栓能力测定其活性，有琼脂糖-纤维蛋白平板、纤维蛋白块溶解时间法(CLT法)等；二是利用纳豆激酶的水解能力测定酶活力，如TAME法、酪蛋白-Folin-法、四肽底物法等。

其中国内外的专家学者们对于纳豆激酶活性测定普遍使用的两种检测手法为：纤维蛋白块溶解时间法(CLT法)、琼脂糖-纤维蛋白平板法。其中琼脂糖-纤维蛋白平板法为检测纳豆激酶酶活性中最多采用的方法，因而被广泛使用，其技术发展的相对其他检测方法较为成熟，并且有国家标准文件对其进行规范。该方法主要是根据酶溶解纤维蛋白及溶解圈的大小来判断酶活性的大小，能直观的反映出酶活性的作用。但该方法也存在许多条件限制，例如在观察过程中容易受到检测人员的主观影响，且在实验过程中酶易受温度条件的影响而影响实验结果，花费的检测成本较高，时间长，不适合大批量样品的检测，灵敏度较低。

目前,常用的方法琼脂糖-纤维蛋白平板法外，其中也有采用TAME法测定纳豆干中的纳豆激酶活性含量，且该方法目前应用的范围较小，没有得到大范围的普及。据相关资料的显示，该方法是能测出纳豆中的纳豆激酶活性含量，但是其实验方案没有得到具体的方法优化改进。

发明内容

为实现对纳豆激酶酶活性的检测并建立其标准，在本发明的第一方面提供了一种纳豆干中纳豆激酶的酶活性检测方法，包括：基于单因素试验方法和正交试验法，确定TAME法的多个最优实验条件，所述实验条件包括试剂添加量和反应时间；建立甲醇含量与吸光度的标准曲线；从待测纳豆干中提取具备酶活性的样品粗酶液；基于多个最优实验条件，对样品粗酶液进行TAME法实验；待试验结束后，通过标准曲线计算待测纳豆干的酶活性含量。

在本发明的一些实施例中，所述基于单因素试验方法和正交试验法，确定TAME法的多个最优实验条件包括：确定影响甲醇含量与吸光度的多个因素；基于单因素试验方法对每个因素进行变量控制，并确定每个因素的最优实验条件的变量区间；基于每个因素的变量区间，确定正交试验的多个组合实验条件。

进一步的，所述多个因素包括三氯乙酸、高锰酸钾、无水亚硫酸钠和变色酸的用量，以及沸水浴反应时间。

优选的，所述基于每个因素的变量区间，确定正交试验的多个组合实验条件包括：将三氯乙酸、高锰酸钾、变色酸用量和沸水浴时间作为控制变量，进行正交试验。

在本发明的一些实施例中，所述待试验结束后，通过标准曲线计算待测纳豆干的酶活性含量包括：根据甲醇含量与吸光度的标准曲线，计算待测纳豆干的甲醇含量；根据甲醇含量和TAME法，计算待测纳豆干的酶活性含量。

进一步的，所述根据甲醇含量和TAME法，计算待测纳豆干的酶活性含量通过如下步骤实现：

TAME＝(X×V1/m1×t)×V2/m2，

其中，TAME表示豆干的酶活性含量，X表示甲醇含量，V1表示稀释倍数，V2表示样品粗酶液提取体积；t表示NK与TAME底物反应的时间；m1表示NK样品溶液的浓度，m2表示样品称取质量。