[发明专利]一种检测干制鱼制品中4-羟基-己烯醛和4-羟基-壬烯醛的方法

权利要求书

1.一种检测干制鱼制品中4-羟基-己烯醛和4-羟基-壬烯醛的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)称取适量样品，加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、混合内标溶液以及衍生液，涡旋，均质，黑暗中衍生1.5～2.5h，加入二氯甲烷，提取离心，取下清液，重复提取数次后合并提取液，加入二氯甲烷定容；然后移取适量提取液，氮吹至干，加入淋洗液，超声溶解，待净化；

(2)采用二氯甲烷和淋洗液平衡SPE柱，将步骤(1)待净化的溶液过滤至SPE柱中，加入淋洗液淋洗得到目标物，采用三氯甲烷洗脱目标物，收集洗脱液，氮吹至干，加入甲醇，超声溶解，过滤，即得待测的样品溶液；

(3)将样品溶液采用液相色谱-串联质谱仪进行测定，内标法定量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合内标溶液为10mg/L的HHE-d3和HNE-d3混合内标溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述淋洗液为体积比为2：1的正己烷和三氯甲烷混合液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生液为盐酸溶液与2,4-二硝基苯肼的混合溶液，其制备方法为：准确称取0.125g的2,4-二硝基苯肼溶于250mL的1mol/L盐酸溶液中，超声震荡至完全溶解。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，称取适量样品，加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、混合内标溶液以及衍生液，涡旋1min，均质30s，置于暗室中衍生2h，再加入二氯甲烷，轻微振荡提取5min，7000r/min离心5min，取下清液，重复提取3次，合并提取液，加入二氯甲烷定容；然后移取适量提取液，氮吹至干，加入淋洗液，超声溶解。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，先后用二氯甲烷和淋洗液平衡SPE小柱，将待净化溶液过滤至SPE柱中，待液面降至与筛板平行，用淋洗液进行淋洗，弃去淋洗液，用三氯甲烷洗脱目标物，收集洗脱液，氮吹至干，加入甲醇，超声溶解，用0.22μm有机滤膜过滤。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)液相色谱-串联质谱仪测定中高效液相色谱条件为：

色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3100 mm*2.1mm，1.8μm，或其他等效色谱柱；

流动相：包括A相和B相，其中A相为pH3.55的乙酸溶液，B相为乙腈；

流动相洗脱程序为：0～10min，A相体积分数由60％逐渐降低为35％；10～11min，A相体积分数由35％逐渐降低为0％；11～14min，A相体积分数稳定在0％；14～15min，A相体积分数由0％逐渐升高为60％；15～18min，A相体积分数稳定在60％；

流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)液相色谱-串联质谱仪测定中质谱条件包括：

离子源：ESI；扫描方式：负离子模式；检测方式：MRM；干燥气温度：300℃；干燥气流速：7L/min；雾化器压力：30psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)的内标法定量采用的混合标准工作溶液为浓度为10，20，50，100，200，300μg/L的系列混合标准工作溶液，所述混合标准工作溶液由10mg/L的HHE和HNE混合标准溶液、以及10mg/L的HHE-d3和HNE-d3混合内标溶液、加入衍生液配制得到。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品为捣碎混匀的干制鱼制品可食部分，所述干制鱼制品为鱼类干制品，包括鲅鱼、鲳鱼、鳕鱼、刀鱼。