[发明专利]一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法及其特异性引物

权利要求书

1.一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步、从鱼群中取一条鱼作为目标鱼，所述鱼群含有黄颡鱼、长吻鮠、以黄颡鱼为母本且以长吻鮠为父本的杂交F1代之一、之二或三者；提取目标鱼的基因组DNA；

第二步、采用特异性引物针对目标鱼的基因组DNA进行PCR扩增；所述特异性引物由正向引物和反向引物构成，所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；所述特异性引物针对的微卫星标记的序列为5′-aaataaataaataaat-3′；

第三步、采用琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增反应产物进行检测；根据琼脂糖凝胶电泳检测结果鉴别目标鱼：当检测结果有一个条带且位于150±10bp时，该目标鱼为黄颡鱼；当检测结果有一个条带且位于230±10bp时，该目标鱼为长吻鮠；当检测结果有两个条带，一个条带位于150±10bp且另一个条带位于230±10bp时，该目标鱼为以黄颡鱼为母本且以长吻鮠为父本的杂交F1代。

2.根据权利要求1所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法，其特征是，第一步中，所述鱼群由黄颡鱼、长吻鮠、以黄颡鱼为母本且以长吻鮠为父本的杂交F1代之一、之二或三者构成；从目标鱼身上剪下适量组织，然后从该组织中提取目标鱼的基因组DNA；所述组织为尾鳍。

3.根据权利要求1所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法，其特征是，第二步中，所述特异性引物针对的微卫星标记及其上下游的序列如SEQ ID NO.3所示。

4.根据权利要求3所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法，其特征是，所述PCR扩增反应体系为20μL体系，含有：灭菌水7.4μL，2×Taq Plus Mix 10μL，10μM正反特异性引物各0.8μL，目标鱼的基因组DNA 1μL；所述PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；33个循环：95℃变性30sec，49.8℃退火30sec，72℃延伸30sec；最后72℃延伸5min，4℃保存。

5.根据权利要求1所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法，其特征是，第三步中，采用4μL DNA Marker 2000以及3μL PCR扩增反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。

6.一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别用特异性引物，其特征是，所述特异性引物由正向引物和反向引物构成，所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；所述特异性引物针对的微卫星标记的序列为5′-aaataaataaataaat-3′。

7.一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别试剂盒，其特征是，所述试剂盒包括权利要求6所述的针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别用特异性引物。

8.根据权利要求7所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别试剂盒，其特征是，所述特异性引物针对的微卫星标记及其上下游的序列如SEQ ID NO.3所示。

9.根据权利要求8所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别试剂盒，其特征是，所述试剂盒还包括：灭菌水、2×Taq Plus Mix。

10.根据权利要求9所述的一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别试剂盒，其特征是，所述试剂盒在使用时采用的PCR扩增反应体系为20μL体系，含有：灭菌水7.4μL，2×Taq Plus Mix 10μL，10μM正反特异性引物各0.8μL，目标鱼的基因组DNA 1μL；所述试剂盒在使用时采用的PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；33个循环：95℃变性30sec，49.8℃退火30sec，72℃延伸30sec；最后72℃延伸5min，4℃保存。