[发明专利]一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法及其特异性引物

说明书

本发明涉及一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法及其特异性引物。该鉴别方法采用由正向引物SEQ ID NO.1和反向引物SEQ ID NO.2构成的特异性引物，针对目标鱼的基因组DNA进行PCR扩增，并以琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增反应产物进行检测，最后根据电泳图结果直接得出鉴别结果。本发明鉴别方法只需针对鱼种基因组DNA进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，即可根据电泳结果中清晰且差异明显的扩增条带直接得出针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别结果，快速准确，成本低，操作简单，实用性强。

技术领域

本发明涉及一种针对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴别方法及其特异性引物，属于水产养殖技术领域。

背景技术

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)和长吻鮠(Leiocassis longirostris)分别隶属于鲇形目鲿科黄颡鱼属和鮠属，是鲿科鱼类中两个具有经济价值的养殖品种，肉嫩刺少且味道鲜美，深受消费者喜欢。虽然当前鲿科鱼类繁养规模迅速扩大，但是相关的种质改良研究却明显滞后。目前已有许多针对鲿科鱼类远缘杂交的研究，但未见有关黄颡鱼和长吻鮠育种方面的报道。黄颡鱼因饲养成活率高、适应性强等特点，已成为重要的淡水鱼类养殖对象。长吻鮠相比于黄颡鱼有着生长速度快和营养价值高等特点。为整合两种鱼的优势，通过黄颡鱼(♀)和长吻鮠(♂)所获得的杂交F1代具有生长快速、抗逆性强等优点，有望开发成黄颡鱼新品系。但由于该杂交F₁代通常具有两种亲本的形态特征，容易造成混淆，不易直接分辨，亟待研发出能够对黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F₁代进行区分的鉴定技术手段。

微卫星是由2至6个核苷酸组成的具有高度变异性的简单重复DNA序列，具有多态性、杂合率高、共显性遗传等特点。微卫星标记现已在水产动物的群体遗传结构的分析、物种遗传多样性的鉴定以及遗传基因连锁图谱的构建等方面得到应用。但目前为止，关于黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代的鉴定研究尚未有报道。

经检索发现，申请号CN201610159878.9、申请公布号CN105695590A的发明专利申请公开了一种用于鉴定黄颡鱼和长吻鮠杂交种的引物组、试剂盒和方法，可鉴定黄颡鱼和长吻鮠杂交种的父本和母本。然而，该技术方案是用来鉴定黄颡鱼、长吻鮠谁为父本谁为母本，并不能用来鉴别区分黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代；其引物是基于COI基因和ITS序列设计的引物，并非针对微卫星设计；在基于COI基因进行PCR扩增反应后需测序并构建进化树聚类图，方可鉴定出杂交种的父母本，过程稍显繁琐。

专利号CN201910755624.7、授权公告号CN110331217B的发明专利公开了一种适用于尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交种的微卫星标记亲权鉴定引物、方法及应用，然而其技术方案是用来指导这三种罗非鱼在育种过程中的种群遗传和家系系谱管理，并非用来直接鉴别区分这三种罗非鱼，而且这三种罗非鱼与黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代差异巨大，无法直接套用；此外，其技术手段需要用到荧光标记微卫星引物PCR扩增和多重毛细管电泳分型，以及需要利用软件进行亲权鉴定，稍显繁琐。因此，该技术方案对于鉴别区分黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代并无教导或启示。

专利号CN202010344849.6、授权公告号CN111394478B的发明专利公开了一种PCR微卫星引物及其用于大黄鱼亲子鉴定的方法，然而其技术方案是用来解决现有的大黄鱼近亲交配、种群遗传多样性下降的问题，能够根据基因型进行大黄鱼待测样品之间的亲子鉴定，但并非用来直接鉴别区分各鱼种，而且大黄鱼与黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代差异巨大，无法直接套用；此外，其技术手段需要利用软件进行亲子鉴定，稍显繁琐。因此，该技术方案对于鉴别区分黄颡鱼、长吻鮠及其杂交F1代并无教导或启示。