[发明专利]分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜、制备方法及应用

权利要求书

1.一种分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜，其特征在于，所述分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜为PVA-P-CaMKII纳米纤维膜，所述PVA-P-CaMKII纳米纤维膜由磷酸化的CaMKII蛋白通过磷酯键与PVA固体载体键合得到。

2.一种权利要求1所述的分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将PVA和CaMKII蛋白混合冻干后研磨至5nm粉末，在氮气氛围下逐滴加入POCl₃、吡啶与氯仿的混合制剂，0-4℃反应20-30min，之后升温至10-15℃，继续反应20-30min，最后升温至18-20℃，继续反应20-30min，加入丙酮洗涤3遍之后用氮气流吹干，得到PVA-P-CaMKII复合物；

S2.将所述PVA-P-CaMKII复合物溶于水，制得纺丝液，进行静电纺丝，得到纤维膜，将所述纤维膜用盐酸与戊二醛熏蒸交联得到PVA-P-CaMKII纳米纤维膜。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，PVA、CaMKII蛋白、POCl₃、吡啶与氯仿的用量比例为(1-3)g:(20-45)mg:(10-15)mL:(250-320)μL:(10-15)mL。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述纺丝液中，PVA-P-CaMKII复合物的质量百分比浓度为8-10％。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述静电纺丝条件为：电压15-20KV，距离10-15cm，进样速率0.3-0.7mL/h，温度25-35℃，收集板为硅油纸。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述熏蒸交联操作中，盐酸的用量为每dm²的纤维膜10-15mL，戊二醛用量为每dm²的纤维膜5-8mL。

7.权利要求1所述的分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜在分离纯化GluN2B蛋白中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述分离纯化GluN2B蛋白具体为：将PVA-P-CaMKII纳米纤维膜浸渍于含Ca²⁺的神经组织膜蛋白提取液中4℃振荡吸附20min，用PBS洗涤2次；再用含有EGTA的PBS缓冲液洗脱，经超滤离心管离心，PBS洗涤除去EGTA后，收集得到GluN2B蛋白。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述含Ca²⁺的神经组织膜蛋白提取液为含CaCl₂的神经组织膜蛋白提取液，其中，CaCl₂的浓度为2.0-2.5mmol/L。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述含有EGTA的PBS缓冲液中，EGTA的浓度为2.5-3.0mmol/L。