[发明专利]分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜、制备方法及应用

说明书

本发明属于生物医学工程领域，公开了一种分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜、制备方法及应用。纤维膜由磷酸化的CaMKII蛋白通过磷酯键与PVA固体载体键合得到。制备方法包括：将PVA和CaMKII蛋白用三氯氧磷交联，制备PVA‑P‑CaMKII复合物；(2)利用PVA‑P‑CaMKII制备纺丝液，静电纺丝得PVA‑P‑CaMKII纳米纤维膜，即分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜。具体应用为：将纤维膜浸渍于含Ca²⁺的膜蛋白提取液中吸附；用含有EGTA的PBS缓冲液洗脱，得到GluN2B蛋白。本发明制备的纤维膜能够高效富集并纯化GluN2B蛋白。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，具体涉及一种分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜、制备方法及应用。

背景技术

NMDAR受体，是一种离子型谷氨酸受体，其与突触的可塑性和学习记忆密切相关。通过该受体本身、其共轭的离子通道及调节部位3者形成的复合体而发挥功能，对Ca²⁺高度通透。每个NMDAR受体上含有两个谷氨酸和两个甘氨酸结合识别位点，谷氨酸和甘氨酸均是受体的特异性激活剂。它是中枢神经系统内一类重要的兴奋性氨基酸受体。NMDAR受体不仅在神经系统发育过程中发挥着重要的生理作用，如可调节神经元的存活，调节神经元树突、轴突结构发育及参与突触可塑性的形成等；在神经元回路的形成中NMDAR受体亦起着关键作用，有资料表明NMDAR受体是学习与记忆过程中一类至关重要的受体。

突触部位存在GluN2B的NMDA受体能保持活性连续的细胞交流，大量动物实验证据暗示存在GluN2B的NMDA受体诱导兴奋性毒性细胞死亡和β淀粉样蛋白(Aβ)突触功能障碍。因此，抑制GluN2B-NMDA受体被认为是阿兹海默症提供神经保护和改善认知功能的一个潜在治疗策略。GluN2B蛋白被神经科学广泛关注。但是在神经科学研究过程中，分离纯化GluN2B蛋白难度较大。目前还没有简易可操作的标准化试剂盒及方法用于获得GluN2B蛋白。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜、制备方法及应用，该纤维膜制备方法简单，能够高效富集并纯化GluN2B蛋白。

为了解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

一种分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜，所述分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜为PVA-P-CaMKII纳米纤维膜，所述PVA-P-CaMKII纳米纤维膜由磷酸化的CaMKII蛋白通过磷酯键与PVA固体载体键合得到。

本发明还提供了一种上述分离纯化GluN2B蛋白用纤维膜的制备方法，包括如下步骤：

S1.将PVA(聚乙烯醇)和CaMKII蛋白(钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II)混合冻干后研磨至5nm粉末，在氮气氛围下逐滴加入POCl₃、吡啶与氯仿的混合制剂，0-4℃反应20-30min，之后升温至10-15℃，继续反应20-30min，最后升温至18-20℃，继续反应20-30min，加入丙酮洗涤3遍之后用氮气流吹干，得到PVA-P-CaMKII复合物；

S2.将所述PVA-P-CaMKII复合物溶于水，制得纺丝液，进行静电纺丝，得到纤维膜，将所述纤维膜用盐酸与戊二醛熏蒸交联得到PVA-P-CaMKII纳米纤维膜。

进一步的，上述制备方法的步骤S1中，PVA、CaMKII蛋白、POCl₃、吡啶与氯仿的用量比例为(1-3)g:(20-45)mg:(10-15)mL:(250-320)μL:(10-15)mL。

进一步的，上述制备方法的步骤S2中，所述纺丝液中，PVA-P-CaMKII复合物的质量百分比浓度为8-10％。

进一步的，上述制备方法的步骤S2中，所述静电纺丝条件为：电压15-20KV，距离10-15cm，进样速率0.3-0.7mL/h，温度25-35℃，收集板为硅油纸。