[发明专利]用于鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子标记引物组合及方法

说明书

本发明公开了用于鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子标记引物组合及方法，该SSR分子标记引物组合包括MSSR029，MSSR036，MSSR041，MSSR092共4对SSR分子标记引物。基于所述SSR分子标记引物组合鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的方法，按以下步骤实现：首先提取待检测六妹羊肚菌菌株的菌丝体基因组DNA，再用SSR分子标记引物组合对DNA进行PCR扩增，对扩增好的PCR产物进行进行荧光毛细管电泳检测，比对荧光峰图，即可鉴定出六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株。本发明提供的基于SSR分子标记引物组合鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的方法，可在菌丝阶段对其进行快速鉴别，避免经过选育的优良菌株在生产经营和市场流通过程中与其它六妹羊肚菌菌株混杂，从而有效保护知识产权，对羊肚菌生产过程中品种的真实性鉴定具有重要意义。

技术领域

本发明属于食用菌分子生物学领域，具体涉及用于鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子标记引物组合及方法。

背景技术

六妹羊肚菌（ Morchella sextelata M. Kuo），隶属子囊菌门Ascomycota、盘菌纲Pezizomycetes、盘菌目Pezizales，羊肚菌科Morchellaceae，是一种味道鲜美的食药兼用真菌，具有极高的营养价值。其子实体肉质脆嫩，含有丰富的蛋白质，多种维生素，铁、锌等多种矿质元素，其独特的风味受到全球美食爱好者的青睐。

野生羊肚菌广泛分布于世界各地，但资源非常有限。自1882年以来，人们一直致力于培养和驯化羊肚菌，主要以模拟自然环境出菇的仿生栽培为主。2000年后，随着外源营养袋技术的面世，羊肚菌栽培进入规模化种植阶段。近几年羊肚菌的人工种植在国内迅速扩张，全国大部分地区均有栽培。目前在我国实现人工栽培的羊肚菌为黑色羊肚菌支系的梯棱羊肚菌（ M. importuna）、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌（ M. eximia）、头丝羊肚菌（ M. exuberans）、欧式羊肚菌（ M. oweri）、Mel-13（系统发育种）和Mel-21，其中主要的栽培物种为梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌。

虽然羊肚菌已经基本实现人工栽培，但是其瓶颈问题依然存在。目前市场上的羊肚菌菌种杂乱，菌种名称混乱，菌种质量参差不齐，是出菇不稳定、产量低、重复性差等问题出现的主要原因。筛选合适的分子标记对羊肚菌栽培品种的准确鉴定、知识产权保护和新品种选育具有重要意义。

简单重复序列SSR（simple sequence repeat）是一类由1-6个碱基组成的基本串联重复核苷酸序列，也称微卫星序列。SSR分子标记是基于重复序列两侧特定的保守序列设计引物，来扩增检测重复序列长短差异的DNA分子标记。SSR分子标记因其多态性高、重复性好、共显性、分布均匀、覆盖面广等优点，广泛应用于生物遗传图谱绘制、遗传多样性分析、品种鉴定、基因定位和分子标记辅助育种等方面。

现有的关于羊肚菌SSR分子标记的研究大多基于不同物种的羊肚菌菌株的遗传多样性分析，针对六妹羊肚菌物种内的分子标记开发研究尚未见报道。因此，根据上述羊肚菌种业的发展现状，结合现代分子生物学技术开发精准有效的六妹羊肚菌菌株品种鉴定方法对于羊肚菌的产业发展具有重要意义。

发明内容

本发明的第一目的在于提供用于鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子标记引物组合，本发明的第二目的在于提供基于所述SSR分子标记引物组合鉴定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的方法。

本发明中六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株已于2022年4月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；保藏编号为CGMCC NO.40183。