[发明专利]检测四环素治疗幽门螺杆菌感染的耐药基因16S RNA突变情况的引物、试剂盒和方法在审
| 申请号： | 202211470154.8 | 申请日： | 2022-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN115786551A | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 王淑一;张敏;何咏梅 | 申请（专利权）人： | 济南艾迪康医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 黄素萍 |
| 地址： | 250031 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 四环素 治疗 幽门 螺杆 感染 耐药 基因 16 rna 突变 情况 引物 试剂盒 方法 | ||
1.检测四环素治疗幽门螺杆菌感染的耐药基因16S RNA的引物，其特征在于所使用的扩增引物为：
SEQ1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTACGCATAGGTCATGTGCCTC
SEQ1-R：AACAGCTATGACCATGCGGAGTTAGCCGGTGCTTAT
SEQ2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAACTGAGACACGGTCC
SEQ2-R：AACAGCTATGACCATGTCCACCTACCTCTCCCACAC
SEQ3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGGATAGTCAGTCAGGTG
SEQ3-R：AACAGCTATGACCATGAATCTTGCGACCGTACTCCC
SEQ4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTCCACGCCCTAAACGATG
SEQ4-R：AACAGCTATGACCATGCCCCACCTTCCTCCTCCTTA
SEQ5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCGTGTCGTGAGATGTTGGG
SEQ5-R：AACAGCTATGACCATGGAGTACAAGACCCGGGAACG。
2.检测四环素治疗幽门螺杆菌感染的耐药基因16S RNA的引物，其特征在于所有扩增产物都用同样的测序引物，序列为：
S1-TGTAAAACGACGGCCAGT
S2-AACAGCTATGACCATG。
3.检测四环素治疗幽门螺杆菌感染的耐药基因16S RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括
①胃粘膜石蜡组织样本DNA抽提试剂；
②检测体系PCR扩增反应试剂；包括扩增引物
③测序体系试剂；包括测序引物；
④阳性对照品和阴性对照品。
其中，扩增引物和测序引物碱基序列均为：
SEQ1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTACGCATAGGTCATGTGCCTC
SEQ1-R：AACAGCTATGACCATGCGGAGTTAGCCGGTGCTTAT
SEQ2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAACTGAGACACGGTCC
SEQ2-R：AACAGCTATGACCATGTCCACCTACCTCTCCCACAC
SEQ3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGGATAGTCAGTCAGGTG
SEQ3-R：AACAGCTATGACCATGAATCTTGCGACCGTACTCCC
SEQ4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTCCACGCCCTAAACGATG
SEQ4-R：AACAGCTATGACCATGCCCCACCTTCCTCCTCCTTA
SEQ5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCGTGTCGTGAGATGTTGGG
SEQ5-R：AACAGCTATGACCATGGAGTACAAGACCCGGGAACG
S1-TGTAAAACGACGGCCAGT
S2-AACAGCTATGACCATG。
4.检测四环素治疗幽门螺杆菌感染的耐药基因16S RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)抽提胃粘膜石蜡组织的基因组DNA；
(2)以步骤1中提取的DNA为模板进行PCR扩增；其中扩增引物序列为：SEQ1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTACGCATAGGTCATGTGCCTC
SEQ1-R：AACAGCTATGACCATGCGGAGTTAGCCGGTGCTTAT
SEQ2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGGAACTGAGACACGGTCC
SEQ2-R：AACAGCTATGACCATGTCCACCTACCTCTCCCACAC
SEQ3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGGATAGTCAGTCAGGTG
SEQ3-R：AACAGCTATGACCATGAATCTTGCGACCGTACTCCC
SEQ4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTCCACGCCCTAAACGATG
SEQ4-R：AACAGCTATGACCATGCCCCACCTTCCTCCTCCTTA
SEQ5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCGTGTCGTGAGATGTTGGG
SEQ5-R：AACAGCTATGACCATGGAGTACAAGACCCGGGAACG；
(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；其中测序引物序列为：
S1-TGTAAAACGACGGCCAGT
S2-AACAGCTATGACCATG；
(4)将测序结果与标准序列进行比对，确定四环素治疗幽门螺杆菌感染的耐药基因16SRNA突变情况。
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