[发明专利]抗病原菌的牛源解淀粉芽孢杆菌的制备方法

说明书

本发明公开了一种抗病原菌的牛源解淀粉芽孢杆菌的制备方法，该方法的具体步骤为：(1)牛源肠道微生物中芽孢杆菌的分离纯化；(2)分离纯化芽孢杆菌16SrRNA基因扩增测序；(3)分离菌株的分子学鉴定：将测序结果在NCBI中的BLAST软件进行GeneBank同源性比较，构建种属系统发育树；(4)致病菌抑制能力及抗生素敏感度测定；(5)益生特性的评价：对鉴定得到的菌株进行耐酸耐胆盐、耐人工肠胃液、自聚集率实验中菌株的存活率进行测定；(6)产水解酶测定：纤维素酶和淀粉酶。本发明通过从健康牛新鲜粪便样品中分离纯化出解淀粉芽孢杆菌的细菌，所得到的菌株在体外抑菌能力和抗生素抗菌性具有突出的优点。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域和益生菌制剂领域，具体涉及抗病原菌的牛源益生解淀粉芽孢杆菌及其制备。

背景技术

自1950年代以来，抗生素已被用于畜牧业领域，用于促进生长、治疗和预防疾病。制药工业生产的抗生素高达80％用于食品生产，大多数抗生素被用作饲料添加剂促进动物的生长(Low CX,Tan LT,Ab Mutalib NS,Pusparajah P,Goh BH,Chan KG,Letchumanan V,Lee LH.Unveiling the Impact ofAntibiotics and Alternative Methods for AnimalHusbandry：A Review.Antibiotics(Basel).2021May 13；10(5)：578.)。然而，研究表明，滥用抗生素导致出现了威胁动物健康和人类健康的多重耐药病原体，耐药菌株对于抗生素不敏感，可在动物机体内大量繁殖，造成动物体内菌群失调问题以及抗生素本身的残留性问题越来越严重，影响正常机体健康(HAFIZ IFTIKHAR HUSSAIN.Functional Genomic andTranscriptomic Profiling of Pathogenic Multidrug Resistant and HighlyVirulent Escherichia Coli ofPoultry Origin[D].华中农业大学,2017.)；因此需要寻找一种可用于临床及生产的抗生素的代替品，近年来，微生物作为饲料添加剂应用于畜牧业也得到了认可，国内外研制也出了多种益生菌活菌制剂，益生菌活菌制剂来替代抗生素作为一种新的饲料添加剂必将成为一种新趋势(Cheng G,Hao H,Xie S,Wang X,Dai M,Huang L,Yuan Z.Antibiotic alternatives：the substitution of antibiotics inanimal husbandry？Front Microbiol.2014May13；5：217.)。2020年7月1日起，农业农村部颁布了饲料生产企业停止以促生长为目的的药物饲料添加剂的使用，因此微生物代替抗生素成为饲料添加剂必将成为一种新趋势。

抑菌性能是饲用微生态制剂平衡畜禽肠道菌群、促进生产性能的重要机制之一(柳成东,肖明霞,李琦华,等.饲用益生菌凝结芽孢杆菌抑菌性能的研究[J].中国畜牧杂志,2021,57(10):6.)。禽肠道主要有害菌为沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。沙门氏菌感染易引发副伤寒，是家畜生产中常见的肠道传染病之一，导致幼仔严重下痢和败血症，病死率高(袁迎春.家畜沙门氏菌病的分析和防治措施[J].现代畜牧科技,2020(2):2.)。大肠杆菌属于一种细菌，会引起幼畜腹泻和败血症(汪士龙.牛大肠杆菌腹泻疾病诊治[J].农牧与食品机械,2019,000(013):P.124-125.)。金黄色葡萄球菌是饲料及饲料原料的主要污染有害菌之一，动物摄入污染金黄色葡萄球菌的饲料，肠道及肝脏等组织受到细菌及毒素的损伤，从而严重降低生产性能，增加死亡的概率(白延波.饲料中金黄色葡萄球菌活菌的快速检测[J].畜牧兽医科技信息,2021(9):1.)。