[发明专利]一种基于丹磺酰化及液相色谱质谱联用的白酒中二肽定量方法

权利要求书

1.一种基于丹磺酰化及液相色谱质谱联用的白酒中二肽定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取白酒样品，将所述白酒样品进行浓缩后得到浓缩样品；

(2)量取所述浓缩样品得到待测样品，向所述待测样品中加入内标物，干燥后加入丹磺酰氯乙腈溶液，再调节pH值后进行衍生化反应，反应结束后加入混合液体，混合均匀后离心，取上清液得到待测液体；

所述混合液体包括丹磺酰氯乙腈溶液、pH值缓冲溶液以及盐酸；

(3)将所述待测液体送入液相色谱质谱联用仪中进行检测，根据检测结果对二肽进行定性定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：取80～120mL所述白酒样品，将所述白酒样品浓缩20～30倍后得到浓缩样品；

优选地，所述步骤(1)包括：取100mL所述白酒样品，将所述白酒样品进行蒸发浓缩25倍后得到浓缩样品；

优选地，将所述白酒样品在35～45℃下旋转蒸发浓缩25倍后得到浓缩样品；

更优选地，将所述白酒样品在40℃下旋转蒸发浓缩25倍后得到浓缩样品。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括：量取18～22μL所述浓缩样品得到待测样品，向所述待测样品中加入9～11μL的内标物，冷冻干燥后加入8～12μL丹磺酰氯乙腈溶液，涡旋1～3min后加入8～12μL的pH值为9的缓冲溶液，涡旋1～3min后加入碱性溶液调节pH值后进行衍生化反应，反应结束后加入混合液体，混合均匀后离心，取上清液得到待测液体；

优选地，所述步骤(2)包括：量取20μL所述浓缩样品得到待测样品，向所述待测样品中加入10μL的内标物，冷冻干燥后加入10μL丹磺酰氯乙腈溶液，涡旋2min后加入10μL的pH值为9的缓冲溶液，涡旋2min后加入碱性溶液调节pH值后进行衍生化反应，反应结束后加入混合液体，混合均匀后离心，取上清液得到待测液体；

优选地，所述缓冲溶液为碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液、碳酸钾/碳酸氢钾缓冲溶液、磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲溶液中的一种；

优选地，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，或氢氧化钠溶液和氢氧化钾溶液的混合溶液；

更优选地，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度为4mol/L；

优选地，所述衍生化反应的反应温度为55～65℃，反应时间为1～1.5h；

更优选地，所述衍生化反应的反应温度为60℃，反应时间为1h；

优选地，所述离心的相对离心力为14000～16000g，所述离心的离心时间为8～12min；

更优选地，所述离心的相对离心力为15000g，所述离心的离心时间为10min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标物为L-苯丙氨酸-¹³C₉-¹⁵N或L-丝氨酸-¹³C₃-¹⁵N；

优选地，所述内标物为L-苯丙氨酸-¹³C₉-¹⁵N；所述L-苯丙氨酸-¹³C₉-¹⁵N的浓度为1ng/mL。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述丹磺酰氯乙腈溶液的浓度为3～5mg/mL；

优选地，所述丹磺酰氯乙腈溶液的浓度为5mg/mL。