[发明专利]一种提高引导编辑系统碱基编辑效率的方法

权利要求书

1.成套系统，所述成套系统包括融合蛋白、esgRNA和pegRNA；

所述融合蛋白依次包括反转录酶、Cas9切刻酶、自切割寡肽和筛选标记蛋白；

所述esgRNA靶向MLH1基因靶点序列；

所述pegRNA依次包括esgRNA’、逆转录模板序列、引物结合位点序列、连接序列和tevopreQ1基序；所述esgRNA’靶向目标基因靶点序列。

2.根据权利要求1所述的成套系统，其特征在于：

所述esgRNA由MLH1基因靶点序列和esgRNA骨架组成；

或，所述esgRNA’由目标基因靶点序列和esgRNA骨架组成；

或，所述pegRNA由复合型启动子驱动表达；所述复合启动子依次由E35S启动子、CmYLCV启动子和OsU3启动子组成；

或，所述E35S启动子的核苷酸序列如序列7第10025-10461位所示；

或，所述CmYLCV启动子的核苷酸序列如序列7第10462-10920位所示；

或，所述OsU3启动子的核苷酸序列如序列7第10932-11270位所示。

3.根据权利要求1或2所述的成套系统，其特征在于：所述Cas9切刻酶为Cas9maxn；

或，所述Cas9maxn为A1)或A2)：

A1)氨基酸序列是序列5所示的蛋白质；

A2)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

4.根据权利要求1-3任一所述的成套系统，其特征在于：所述反转录酶为M-MLV RT；

或，所述M-MLV RT为B1)或B2)：

B1)氨基酸序列是序列1所示的蛋白质；

B2)将序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

5.根据权利要求1-4任一所述的成套系统，其特征在于：所述自切割寡肽为来源于病毒基因组的2A自切割寡肽；

或，所述来源于病毒基因组的2A自切割寡肽为来源于猪捷申病毒-1的2A自切割寡肽；

或，所述来源于猪捷申病毒-1的2A自切割寡肽的氨基酸序列为C1)或C2)：

C1)氨基酸序列是序列3所示的蛋白质；

C2)将序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

6.根据权利要求1-5任一所述的成套系统，其特征在于：所述筛选剂抗性蛋白为潮霉素磷酸转移酶；

或，所述潮霉素磷酸转移酶为D1)或D2)：

D1)氨基酸序列是序列4所示的蛋白质；

D2)将序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

7.权利要求1-6任一所述的成套系统在如下S1)-S4)任一种中的应用：

S1)生物体或生物细胞基因组序列的编辑；

S2)制备生物体或生物细胞基因组序列的编辑的产品；

S3)提高生物体或生物细胞基因组序列的编辑效率；

S4)制备提高生物体或生物细胞基因组序列的编辑效率的产品。

8.T1)-T3)任一所述的方法：

T1)基因组序列的编辑方法，包括如下步骤：使生物体或生物细胞表达权利要求1中所述的融合蛋白、权利要求1中所述的esgRNA和权利要求1中所述的pegRNA；

T2)提高生物体或生物细胞基因组序列的编辑效率的方法，包括如下步骤：使生物体或生物细胞表达权利要求1中所述的融合蛋白、权利要求1中所述的esgRNA和权利要求1中所述的pegRNA；

T3)生物突变体的制备方法，包括如下步骤：按照T1)或T2)所述的方法对生物体或生物细胞的基因组序列进行编辑，获得生物突变体。