[发明专利]一种游离β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种游离β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，包括包被有游离β人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液、游离β人绒毛膜促性腺激素系列校准品、酶结合物。本发明利用双抗体夹心法联合磁微粒化学发光技术对游离β人绒毛膜促性腺激素（free β‑hCG）进行检测，以β6表位（free β‑hCG特异性表位）的抗体为捕获抗体，以β1表位（总hCG抗体表位）的抗体为标记抗体，能检测出free β‑hCG的各种变体，克服了现有试剂盒的漏检问题。本发明试剂盒与化学发光免疫技术结合检测，具有很高的检测灵敏度和精密度，特异性强，且与罗氏试剂盒的相关性达到0.9899，表明本发明试剂盒具有广阔的检测应用前景。

技术领域

本发明涉及游离人绒毛膜促性腺激素的检测领域，尤其是涉及一种游离β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒。

背景技术

唐氏综合征又称先天愚型或21三体综合征，是一种胎儿先天缺陷中较为常见的非整倍常染色体异常疾病，表现为智力低下、独特面容、生长发育迟缓，常伴有先天性心脏病、肢体畸形和白血病等。目前，临床上缺乏治疗唐氏综合征的有效方法，该病给患者、家庭和社会带来的沉重的压力。因此，通过孕妇妊娠的早期筛查、诊断检出高危胎儿，对尽早终止妊娠，降低唐氏综合征胎儿的出生率至关重要。

人绒毛膜促性腺激素（Human Chorionicgonadotropin，hCG）是一种糖蛋白激素，它是由胎盘的滋胚层细胞分泌，分子量36.7kDa。人绒毛膜促性腺激素为异源二聚体，具有ɑ亚基和β亚基两个亚单位。其中，游离β人绒毛膜促性腺激素（free β-hCG）是非结合状态的hCG的β亚单位，不仅对早期妊娠诊断有重要意义，还能辅助妊娠相关疾病的筛查。

研究表明，怀有唐氏综合征胎儿的孕妇，其血清中的free β-hCG水平平均比正常孕妇偏高2倍左右，是非常灵敏的指标之一。目前，临床上常将孕早期中的free β-hCG与妊娠相关血浆蛋白A（PAPP-A）、孕中期的free β-hCG与甲胎蛋白（AFP）、游离雌三醇（uE3）、抑制素A（Inhibin A），以及超声检测等项目结合母体因素来提高孕期唐氏综合征中的检出率。

目前国内检测free β-hCG的方法大多为酶联免疫吸附法和时间分辨荧光法。酶联免疫吸附法耗时长，操作繁琐。此外，这两种检测方法检测灵敏度差，检测范围窄，非全自动检测。另外，free β-hCG存在β-hCG核心片段，缺刻游离β-hCG，β亚基羧基末端缺失的β-hCG等多种变体，现有产品通常会由于对某个变体不识别或反应性低导致漏检。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种游离β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，具有检测成本低、重复性好、检测灵敏度高和特异性强的优点。

为实现上述目的，本发明采取下述技术方案：

本发明所述的游离β人绒毛膜促性腺激素检测试剂盒，包括包被有游离β人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液、游离β人绒毛膜促性腺激素系列校准品、酶结合物。

所述包被有游离β人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液中磁微粒的粒径为0.9 μm-1.8 μm，且磁微粒的表面含有羧基活性基团，制备方法为：用PBS缓冲液洗涤磁微粒原液，弃上清，用EDC和N-羟基琥珀酰亚胺对磁微粒活化，使羧基基团暴露出来；用PBS缓冲液洗涤活化后的磁微粒；再加入适量的PBS缓冲液将磁微粒悬浮，然后加入游离β人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，室温震荡2 h；用封闭液封闭5次，封闭后的磁珠2-8℃保存。

在本发明中，游离β人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体和磁微粒的质量比为1:(10-50)。更优选的，两者的质量比可控制在1:(20-30)。

在本发明中，所述封闭液为含有1% BSA、1.5% EDTA、0.2%叠氮化钠、0.1%ProClin300、0.1% BB2的0.05M BIS-TRIS-Propane缓冲溶液。