[发明专利]一种克拉霉素的提纯方法

说明书

本发明涉及一种克拉霉素的提纯方法，过程为：1）将克拉霉素粗品加入到乙醇溶液中，加热升温溶解，保温过滤，所得过滤液Ⅰ降温结晶，离心分离，得到克拉霉素混合物Ⅰ以及克拉霉素乙醇溶液Ⅰ；2）将克拉霉素乙醇溶液Ⅰ继续降温结晶，后离心分离，得到克拉霉素Ⅰ；3）将克拉霉素混合物Ⅰ按照过程1）方式处理，至所得混合物中总杂含量超过30%为止；处理，直至混合物中杂质E和杂质F总量超过30%；所得克拉霉素乙醇溶液Ⅱ采用过程2）方式处理，得到克拉霉素Ⅱ；4）合并克拉霉素，加入到乙醇溶液中，加热升温溶解，保温过滤，降温结晶，离心分离，即可得到克拉霉素精品。本发明是基于克拉霉素、杂质E、杂质F在乙醇溶液中的溶解度具有的较大差异特定，采用逆向结晶方式进行提纯，并梯度循环套用，通过本发明方法大大提升克拉霉素的质量。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，特别是涉及一种克拉霉素的提纯方法。

背景技术

克拉霉素是由红霉素经过肟化反应、醚化反应、甲基化反应和还原反应半合成的十四元半合成大环内酯类抗生素，通过抑制细菌蛋白合成发挥作用，其抗菌谱与红霉素相同，对军团菌、支原衣原体作用强于红霉素。克拉霉素用于呼吸、泌尿、生殖、皮肤软组织、幽门螺杆菌性胃炎等感染，其不良反应较少，是目前临床上广泛使用的抗生素。

现有技术中，克拉霉素主要以硫氰酸红霉素或红霉素A为起始原料，硫氰酸红霉素在甲醇溶液中进行肟化反应生成硫氰酸红霉素肟(简称红肟)，红肟在二氯甲烷或氯仿溶液中进行醚化反应，保护不需要反应的羟基，醚化反应得到红肟保护物在甲基叔丁基醚或甲苯体系进行甲基化反应，甲基化反应得到含有保护物的克拉霉素，然后在甲醇溶液中进行还原反应，脱去克拉霉素上保护物，得克拉霉素粗品。

克拉霉素粗品中杂质主要有三类，第一类为红霉素原料未反应的残留，第二类为中间反应产物，第三类为合成中的副产物。美国药典中记录已知克拉霉素杂质有16种，其中杂质E和杂质F为主要杂质，是甲基化反应过程生成的双甲基化物。在很多药厂的克拉霉素HPLC检测报告中杂质E和杂质F超过总杂的80%，因此分离去除克拉霉素中杂质E和杂质F是提升克拉霉素质量的关键环节。

现有技术中，克拉霉素的提纯工艺研究较少，主要是通过乙醇溶液重结晶实现，如中国抗生素杂志2002年3月第27卷第3期《克拉霉素的合成》,这种工艺由于杂质E、杂质F在乙醇中溶解度小，优先析出，所以去除率较低。

发明内容

本发明的目的就在提供一种有效提高克拉霉素质量的克拉霉素提纯方法。

经过溶解实验测试，克拉霉素、杂质E、杂质F在乙醇溶液中的溶解度有较大差异，70℃乙醇溶液中克拉霉素溶解度达到11.0%，而杂质E、杂质F只有1.0%左右，并随温度降低溶解度降低显著，且克拉霉素溶解液在降温过程中杂质E和杂质F析出较快。因此，本发明设计了一种逆向结晶工艺，即通过先结晶杂质，再析出有效成份的方式，从而提升克拉霉素的质量。具体技术方案为：

1）克拉霉素粗品的分步结晶

首先，将克拉霉素粗品加入到乙醇溶液中，然后加热升温至70℃～80℃使之溶解，溶解液保温过滤，此时，未溶解杂质E和杂质F作为滤渣被弃，含溶解杂质E和杂质F的过滤液Ⅰ则送入结晶罐中，开启冷媒采用降温结晶方式分离杂质，降温至40℃～50℃，降温速率控制在10～20℃/小时，此时更为细化的温度控制可按照克拉霉素粗品中杂质E和杂质F含量确定，具体为，杂质总量在5～10%时，降温温度控制40℃～42℃，杂质总量在11～18%时，降温温度控制43℃～45℃，杂质总量在19～25%时，降温温度控制46℃～48℃，杂质总量在26～30%时，降温温度控制49℃～50℃。之后，离心分离结晶液，得到含有较高杂质E和杂质F的克拉霉素混合物Ⅰ以及克拉霉素乙醇溶液Ⅰ。

其次，将上述分离得到的克拉霉素乙醇溶液Ⅰ压入结晶罐继续降温结晶，温度降至3～10℃后离心分离，降温速率控制在5～15℃/小时，得到含有很低杂质E和杂质F的克拉霉素Ⅰ。