[发明专利]一种ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒及制备方法和应用

权利要求书

1.一种ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒，其特征在于，所述ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒包括外壳和包载于所述外壳中的核心颗粒；所述外壳包括ACE2工程化细胞膜和聚乙二醇修饰脂质的复合物；所述核心颗粒包括生物相容性聚合物和卡莫司他的组合。

2.根据权利要求1所述的ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒，其特征在于，所述ACE2工程化细胞膜采用如下方法进行制备，所述方法包括：将高表达ACE2的细胞悬浮于低渗缓冲液中，经超声处理和差速离心后，得到细胞膜沉淀；将所述细胞膜沉淀用缓冲溶液重悬，得到所述ACE2工程化细胞膜；

优选地，所述高表达ACE2的细胞为高表达ACE2的人肾上皮细胞；

优选地，所述超声处理的温度为0-10℃；

优选地，所述超声处理的时间为5-60s；

优选地，所述差速离心的方法包括：先2000-4000g离心5-30min，取上清液；然后10000-30000g离心5-60min，取上清液；再50000-150000g离心5-100min，得到所述细胞膜沉淀。

3.根据权利要求1或2所述的ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒，其特征在于，所述聚乙二醇修饰脂质包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、1,2-肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺-聚乙二醇、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱-聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合，优选二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇；

优选地，所述ACE2工程化细胞膜与聚乙二醇修饰脂质的质量比为(1-5):1。

4.根据权利要求1-3任一项所述的ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒，其特征在于，所述生物相容性聚合物包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乳酸、聚己内酯中的任意一种或至少两种的组合，进一步优选聚乳酸-羟基乙酸共聚物；

优选地，所述生物相容性聚合物与卡莫司他的质量比为(0.1-10):1。

5.根据权利要求1-4任一项所述的ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒，其特征在于，所述外壳与核心颗粒的质量比为(1-5):1；

优选地，所述ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒的粒径为50-200nm。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将ACE2工程化细胞膜与聚乙二醇修饰脂质的混合溶液用挤出器重复挤出，得到ACE2工程化细胞膜囊泡；

将生物相容性聚合物和卡莫司他进行组装，得到核心颗粒；

(2)将步骤(1)得到的ACE2工程化细胞膜囊泡与核心颗粒混合后依次经过重复挤出和纯化，得到所述ACE2工程化细胞膜载药纳米颗粒。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述混合溶液中ACE2工程化细胞膜与聚乙二醇修饰脂质的质量比为(1-5):1；

优选地，步骤(1)所述重复挤出的次数为2-8次；

优选地，步骤(1)所述重复挤出所用滤膜的孔径为100-500nm。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述生物相容性聚合物与卡莫司他的质量比为(0.1-10):1；

优选地，步骤(1)所述组装的方法包括：将生物相容性聚合物溶液加入到卡莫司他溶液中并进行超声处理，得到所述核心颗粒；

优选地，所述生物相容性聚合物溶液的溶剂为有机溶剂；

优选地，所述有机溶剂包括酮类溶剂；

优选地，所述卡莫司他溶液的溶剂为水和醇类溶剂的混合物；

优选地，所述加入的方法为滴加；

优选地，所述加入在超声条件下进行；

优选地，所述超声处理的时间为1-30min。