[发明专利]悬钩子降糖降脂活性成分的分离、检测方法及抗糖尿病产品中的应用

权利要求书

1.悬钩子降糖降脂活性成分的分离方法，其特征在于，包括以下内容：

(1)将悬钩子醇提物与聚酰胺混合；

(2)将(1)中的混合样品进样至串联的小型中压色谱柱与聚酰胺中压色谱柱中，分离得到五个组分Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5；

其中，聚酰胺中压色谱的色谱条件为：0～540min，0～100％甲醇梯度洗脱，540～700min，100％甲醇等度洗脱，流速35～45mL/min，检测波长为205～215nm。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，聚酰胺中压色谱的色谱条件为：流速40mL/min，检测波长为210nm。

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，将(1)中的混合样品采用干法上样至串联的小型中压色谱柱与聚酰胺中压色谱柱中；

进一步地，五个组分出峰时间分别为：Fr1:10～70min，Fr2:71～160min，Fr3:161～238min，Fr4:239～410min，Fr5:411～700min。

4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述悬钩子醇提物是由悬钩子茎叶经乙醇提取后经过滤、浓缩得到。

5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述悬钩子醇提物与聚酰胺混合后，需经干燥、研磨、过筛处理。

6.对悬钩子中降糖降脂活性成分的检测方法，其特征在于，包括：

S1.采用权利要求1～5任一项所述的分离方法得到的Fr4制备供试品溶液；

S2.采用高效液相色谱-质谱联用仪对组分Fr4进行检测，得到6种黄酮类化合物、2种酚类化合物；

其中，液相色谱条件：采用C18色谱柱，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈，梯度洗脱条件为0min 6％B，25min 30％B，35min 60％B，40min 95％B；检测波长为250～260nm，柱温45～55℃。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，S2中的质谱条件：采用正负离子扫描的检测模式，离子源为：IS源；

所述正离子扫描的具体条件为：扫描范围：m/z 100～1500；离子源温度：600℃；离子源电压：5500V；雾化气GS1：50psi；雾化气GS2：50psi；气帘气CUR：35psi；一级扫描去簇电压：100V，聚焦电压：10V；二级扫描使用TOF MS-Product Ion-IDA模式采集质谱数据，CID能量为-20、-40和-60V；

所述负离子扫描的具体条件为：扫描范围：m/z 100～1500；离子源温度：550℃；离子源电压：-4500V；雾化气GS1：50psi；雾化气GS2：50psi；气帘气CUR：35psi；一级扫描去簇电压：100V，聚焦电压：10V；二级扫描使用TOF MS-Product Ion-IDA 模式采集质谱数据，CID能量为-20、-40和-60V；

进一步地，在出峰时间分别为14.65、16.22、16.53、17.51、18.40、19.13min收集到6种黄酮类化合物；

在出峰时间分别为13.24、15.81min收集到2种酚类化合物。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，S2中的色谱柱为BEH-C18柱色谱柱，规格为：2.1mm×150mm，1.7μm；

液相色谱条件中的流速0.1～1mL/min，进样量1～10μL，检测波长为254nm，柱温50℃；

进一步地，液相色谱条件中的流速0.3mL/min，进样量3μL。

9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述6种黄酮类化合物的结构式如下：

2种酚类化合物的结构式如下：

10.根据权利要求1～5任一项所述的方法分离得到的Fr4在制备抗糖尿病产品中的应用；

进一步地，所述糖尿病为I型或者II型糖尿病；

进一步地，所述产品为增加糖尿病患者胰岛素敏感度、血糖和/或血脂的产品。