[发明专利]一种适用于弧菌的真空冷冻干燥保护剂与冻干方法

权利要求书

1.一种适用于弧菌的真空冷冻干燥保护剂，其特征在于，以水为溶解剂，包括如下浓度的成分：胎牛血清50~150 mL/L、脱脂乳40~120 g/L、海藻糖30~90 g/L、甘露醇40~100 g/L、聚乙烯吡咯烷酮10~50 g/L和氯化钠5~40 g/L。

2.一种权利要求1所述的真空冷冻干燥保护剂的配置方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将脱脂乳、海藻糖、甘露醇和氯化钠溶解于无菌蒸馏水中，灭菌，得到灭菌溶液；

（2）将所述灭菌溶液与胎牛血清和聚乙烯吡咯烷酮混合，得到真空冷冻干燥保护剂；

所述真空冷冻干燥保护剂中胎牛血清的浓度为50~150 mL/L、脱脂乳的浓度为40~120g/L、海藻糖的浓度为30~90 g/L、甘露醇的浓度为40~100 g/L、聚乙烯吡咯烷酮的浓度为10~50 g/L、氯化钠的浓度为5~40 g/L。

3.如权利要求2所述的配置方法，其特征在于，所述聚乙烯吡咯烷酮经过0.20~0.24μm滤膜过滤。

4.一种权利要求1所述的真空冷冻干燥保护剂或权利要求2或3所述的配置方法得到的真空冷冻干燥保护剂的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将弧菌菌液与权利要求1所述的真空冷冻干燥保护剂或权利要求2或3所述的配置方法得到的真空冷冻干燥保护剂按照体积比1:1~3混合；

（2）将步骤（1）的混合物依次进行冷冻和真空冷冻干燥处理。

5.如权利要求4所述的使用方法，其特征在于，所述弧菌菌液的浓度为1×10⁸~1×10¹⁰CFU/ml。

6.如权利要求5所述的使用方法，其特征在于，所述冷冻前还包括预冷，所述预冷的温度为-18~-22℃，时间为2~4h。

7.如权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述冷冻的温度为-70~-90℃，时间为2~6h。

8.如权利要求4~7任一项所述的使用方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥进行两次，第一次真空冷冻干燥的温度为-30~-36℃，时间为16~20h，真空度为0.2~0.4mbar；第二次真空冷冻干燥的温度为-36~-42℃，时间为4~8h，真空度为0.05~0.15mbar。