[发明专利]一种水稻粳-籼亚种的检测引物组、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种水稻粳-籼亚种的检测引物组，其特征在于：

所述引物组包括一对外引物、一对内引物；

上游外引物F3：5’CTATTTTTGTTCTTATACCCATGC3’；

下游外引物B3：5’ATCTATGGGGTCACAGCC3’；

上游内引物FIP：5’CCAAGAAAGGCTATTTTTTAAGGGAAATAGAGAGCGA GTGGGAA3’；

下游内引物BIP：5’ATGGAATAATCCTGAATTCCAATGTGGTCGTGGTAAAT CCATGAA3’。

2.一种水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括权利要求1所述的检测引物组。

3.根据权利要求2所述的水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒还包括DNA聚合酶、LAMP反应液、阴性对照。

4.根据权利要求3所述的水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

5.根据权利要求3所述的水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应液包括MgSO₄、dNTPs、甜菜碱、10×ThermoPol Buffer缓冲液。

6.根据权利要求5所述的水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应液中还包括显色体系，所述显色体系为羟基萘酚蓝。

7.根据权利要求3所述的水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为ddH₂O。

8.根据权利要求2所述的水稻粳-籼亚种的检测试剂盒，其特征在于，

所述上游外引物F3的终浓度范围为0.175μM至0.225μM；

所述下游外引物B3的终浓度范围为0.175μM至0.225μM；

所述上游内引物FIP的终浓度范围为1.4μM至1.8μM；

所述下游内引物BIP的终浓度范围为1.4μM至1.8μM。

9.一种水稻粳-籼亚种的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的检测引物组进行检测，所述方法包括如下步骤：

步骤S1：提取水稻基因组DNA；

步骤S2：配制25μL反应体系：含有终浓度范围为0.175μM至0.225μM的上游外引物F3，终浓度范围为0.175μM至0.225μM的下游外引物B3，终浓度范围为1.4μM至1.8μM的上游内引物FIP，终浓度范围为1.4μM至1.8μM的下游内引物BIP，8mM的MgSO₄，3mM的HNB，1.4mM的dNTPs，0.8M的甜菜碱，10×ThermoPol Buffer缓冲液，320U/mL的Bst聚合酶，模板DNA 2μL，用ddH₂O补齐到25μL；

步骤S3：环介导等温扩增反应：在63℃至65℃扩增反应45min至60min；

步骤S4：步骤S3扩增反应完成后，根据颜色反应读取结果，阴性为紫色，说明水稻品种为籼稻；阳性为蓝色，说明水稻品种为粳稻。