[发明专利]一种冷冻液液萃取联合Fe3

说明书

本发明属于食品检测方法领域。样品经水与乙腈提取，冷冻后取上层，用磁固相萃取辣椒中的真菌毒素。通过选择吸附剂(Fe₃O₄@MWCNTs‑NH₂)、解吸溶剂(乙腈：甲酸＝99：1，v:v)，确定吸附时间、吸附剂用量、解吸溶剂体积等条件，同时检测了辣椒粉中的10种真菌毒素(黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂(AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂)、赭曲霉毒素A(OTA)、杂色曲霉素(ST)、桔青霉素(CIT)、异烟棒曲霉素C(ROQC)、HT‑2毒素和T‑2毒素)。该方法具有良好的线性关系(0.5‑500μg/kg，R²≥0.999)，去除了辣椒基质干扰，单个毒素检测限低至0.2μg/kg，定量限低至0.5μg/kg。加标回收率为70.6～111.7％，日内和日间RSD均小于10％。

技术领域

本发明涉及一种冷冻液液萃取联合Fe₃O₄@MWCNTs-NH₂检测辣椒中多种真菌毒素的方法，属于食品检测方法领域。

背景技术

真菌毒素是一组天然存在的有毒化学物质，由不同的真菌物种产生，主要真菌毒素，如黄曲霉毒素(AFB₁、AFB₂、AFG₁和AFG₂)、赭曲霉毒素A(OTA)、T-2毒素(T-2)与HT-2毒素(HT-2)可能会对健康造成不良影响，如致癌、致突变、致畸、细胞毒性、神经毒性、肾毒性等作用，根据国际癌症研究机构的数据，黄曲霉毒素属于第1组(对人类致癌)，OTA属于2B组(可能对人类致癌)，T-2属于第3组(未按其对人类的致癌性进行分类)。这些真菌毒素是高度稳定和耐热的代谢物，不受传统烹饪方法的影响，这对人类的食品安全问题提出了巨大的挑战。

在生长、收获、储存和消费过程中受到异常气候、储藏环境和运输环境等条件的影响会造成真菌污染，在适宜的条件下，辣椒上的某些真菌会产生真菌毒素。根据我国及国际其他组织(如欧盟委员会)规定，香料中AFB₁和总AFS(AFB₁、AFB₂、AFG₁和AFG₂的总和)的最高允许限量分别为5μg/kg和10μg/kg。此外，香料中OTA的最高允许限量为15μg/kg。辣椒在收获前的生长阶段和收获后的贮运过程中，容易受到真菌毒素污染。而辣椒作为香辛料的一种，其富含油脂、色素等物质，在检测过程中造成很强的基质干扰效应，造成辣椒真菌毒素检测困难。

样品前处理技术是复杂基质样品中真菌毒素检测的必要步骤，起到了浓缩和提纯的作用，从而减少基质效应和对目标组分的干扰。与常规液液萃取技术相比，冷冻诱导液液萃取法操作简单，不需要额外添加试剂诱导分层，可以在较少的有机溶剂消耗下实现真菌毒素的提取和净化。

并且，萃取材料的选择直接关系到检测灵敏和准确度。MWCNTs-NH₂是目前常用于痕量分析的材料，磁性Fe₃O₄利于重复利用。

现有技术中，常常见于辣椒某种真菌毒素的检测，多种辣椒真菌毒素同时检测的方法少，效能低。对于辣椒多种真菌毒素检测的方法，检测限不灵敏，定量限不低，回收率也不高。一般能同时检测到4-6种辣椒真菌毒素。检测种类多的方法，LOD仅为73μg/kg，线性仅为5-600μg/kg(参见Ok,Chung,Lee,Chun,2015；Dhanshetty,Shinde,Goon,Oulkar,Elliott,Banerjee,2022；Pantano et al.,2021；Yogendrarajah,Van Poucke,DeMeulenaer,De Saeger,2013.)。