[发明专利]一种检测MT-PK致病基因突变的方法

说明书

本发明涉及一种检测MT‑PK致病基因突变的方法，其步骤如下：S1，提取被检测者的DNA；S2，设计扩增引物MT‑PK Forward和MT‑PK Reward，将肌强直性营养不良综合征的致病基因MT‑PK外显子14包含CTG核苷酸序列拷贝的片段通过PCR扩增反应进行DNA体外拷贝扩增；S3，比较被检测者MT‑PK的扩增片段和正常MT‑PK的扩增片段的大小。该发明利用MT‑PK基因序列中不稳定的CTG拷贝，将包含CTG重复序列的片段扩增出来，直接通过PCR产物大小的比对来检测MT‑PK致病基因突变，检测程序简单，降低了检测费用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种检测MT-PK致病基因突变的方法。

背景技术

MT-PK基因编码DM1蛋白激酶，该酶的底物包括肌原蛋白，L型钙通道的β亚基和磷脂蛋白，是维持骨骼肌结构和功能所必需的。通过调节核膜的完整性和肌肉特异性基因的表达而在肌细胞分化和存活中发挥作用。MT-PK基因的3-UTR中CTG核苷酸序列有5-38次拷贝，而当这种不稳定的序列拷贝数增加到50-5000次，会导致肌强直性营养不良综合征。肌强直性营养不良综合征为常染色体显性遗传病，主要特征为肌无力、肌强直、肌萎缩，还伴有白内障、性腺机能减退、内分泌功能缺陷、男性秃顶和心律失常。疾病的严重程度随拷贝次数增加而变化。而现有的检测MT-PK基因的技术步骤繁琐，费用昂贵，不利于实际应用。

发明内容

针对现有的不足，本发明提供一种检测MT-PK致病基因突变的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测MT-PK致病基因突变的方法，步骤如下：

S1，提取被检测者的DNA；

S2，设计扩增引物MT-PK Forward和MT-PK Reward，将肌强直性营养不良综合征的致病基因MT-PK外显子14包含CTG核苷酸序列拷贝的片段通过PCR扩增反应进行DNA体外拷贝扩增；

S3，比较被检测者MT-PK的扩增片段和正常MT-PK的扩增片段的大小。

作为优选，所述MT-PK Forward扩增引物的引物序列为：GGGGCTCGAAGGGTCCTTGT，所述MT-PK Reward扩增引物的引物序列为：GTGCGTGGAGGATGGAACAC。

作为优选，所述MT-PK外显子14包含CTG核苷酸序列拷贝的片段序列为：GGGGCTCGAAGGGTCCTTGTAGCCGGGAATGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGGGGGATCACAGACCATTTCTTTCTTTCGGCCAGGCTGAGGCCCTGACGTGGATGGGCAAACTGCAGGCCTGGGAAGGCAGCAAGCCGGGCCGTCCGTGTTCCA TCCTCCACGCAC。

作为优选，还包括步骤S4，在被检测者MT-PK的扩增片段大于357bp时验证被检测者MT-PK的扩增片段的大小。

作为优选，所述PCR扩增反应中预变性的反应条件是反应温度95℃，反应时间5min，变性的反应条件是反应温度95℃，反应时间1min；退火的反应条件是反应温度60℃，反应时间1min；延伸的反应条件是反应温度72℃，反应时间10min，并将退火和延伸依次循环30次。

作为优选，所述步骤S1中提取的DNA提取自被检测者的外周静脉血。

作为优选，所述外周静脉血是在温度为4℃且保存时间不超过一周的外周静脉血。

作为优选，所述步骤S3是通过琼脂糖凝胶电泳来比较两者之间大小的。